川芎嗪对实验性肝纤维化大鼠肝组织中细胞自噬的影响.pdf

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1、·286·中国实用医药2o15年6月第10卷第18期ChinaPracMed，Jun2015，Vo1．10，No．18·实验研究·川芎嗪对实验性肝纤维化大鼠肝组织中细胞自噬的影响张海娟徐军全康杰宋彬妤王明亮姚瑞强【摘要】目的研究川芎嗪对肝纤维化时肝组织中细胞自噬的影响及其可能的机制。方法32只健康雄性SD大鼠随机分为正常对照组10例、肝纤维化模型组11例、川芎嗪治疗组11例，以四氯化碳(CCL4)皮下注射复制大鼠肝纤维化模型，川芎嗪治疗组在复制肝纤维化模型过程中同时给予川芎嗪皮下注射，对照组给予等

2、体积的植物油代替CCL，等体积的生理盐水代替川芎嗪注射液。6周后处死动物，测定血浆内毒素和肝组织羟脯氨酸、丙二醛(MDA)及LC3B蛋白含量，免疫组织化学法观测LC3B蛋白在肝组织中的分布情况。结果肝纤维化时肝组织LC3B的含量明显升高，主要分布于肝窦周隙细胞，且LC3B—I／／LC3B—I的比值与血浆内毒素水平的升高呈正相关；川芎嗪治疗组LC3B表达明显减弱，尤其是肝窦周隙细胞。结论川芎嗪的抗肝纤维化作用可能与其降低血浆内毒素、肝星状细胞(HSC)自噬有关。【关键词】肝纤维化；内毒素；自噬；川芎

3、嗪．DOI：10．14163／j．cnki．11-5547／r．2015．18．191细胞自噬是当前生物医学界热点研究领域之一，近年来厂有限公司，天狼猩红、固绿购自Sigma公司，MDA试剂盒有不少研究报道提示细胞自噬(autophagy)与肝纤维化之间也购自南京建成生物工程研究所；盐酸川芎嗪注射液购自郑存在着密切的关系¨’，干预肝组织中的细胞自噬可能会成州卓峰制药有限公司。肝组织胶原染色及羟脯氨酸fHYP)含为一个新的抗肝纤维化治疗靶点。川芎嗪是从活血化瘀类中量测定参照本实验室以往的方法；血浆内

4、毒素及肝组织药川芎中分离提纯的一种生物碱单体，实验研究表明川芎嗪MDA含量测定依照试剂盒说明书操作：WesternBlot测定组具有良好的抗肿纤维化作用，但其具体作用机制尚不明确。织LC3B蛋白的表达。本实验初步观察肝纤维化过程中细胞自噬现象及川芎嗪治疗1．5统计学方法采用SPSS20．0统计学软件对数据进行统对自噬的影响，进一步研究川芎嗪抗肝纤维化的机制。现报计分析。计量资料以均数±标准差f±S)表示，采用t检告如下。验；计数资料以率(％)表示，采用。检验。相关性分析采1材料与方法用Pearso

5、n法。P

6、川芎嗪治疗组较肝纤维化模型组肝细胞胞浆及CC145m1]kg，之后按3ml／kg皮下注射40％CC14植物油(v／V)胞核中LC3B的阳性颗粒明显减少，差异均具有统计学意义混合液，2次／周，川芎嗪治疗组于造模的同时给予60mg／kg

7、菌无热原技术对照组明显升高(尸<0．01)，而川芎嗪治疗组均明显降低，形态条件下腹主动脉采血取血浆，取肝左叶左半部于4％多聚甲学观察与胶原染色也明显改善。见表1。醛中固定，常规石蜡包埋4gm切片；其余部分液于一86~C冰2．3LC3B—II／LC3B—I的比值的变化正常对照组LC3B—II／箱保存备用。LC3B—I的比值最低，肝纤维化模型组随着内毒素浓度的1．4主要试剂与方法兔源LC3B多克隆抗体，购自美国增加，LC3B—II／LC3B—I的比值逐渐增高，川芎嗪治疗组SIGAM公司(批号L7543

8、)，二抗为羊抗兔抗体，购自北京中LC3B一1I／LC3B—I的比值较肝纤维化组低，但仍明显高于正杉金桥有限公司，G—aetin一抗及二抗均购自北京中杉金桥常对照组fP