沉默后相关信号通路研究.pdf

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1、天津医药2014年11月第42卷第11期1o57细胞与分子生物学MCP一1转染人脐静脉内皮细胞过表达／沉默后相关信号通路研究宋恩李光第周如丹赵学凌【摘要】目的探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP一1)转染人脐静脉内皮细胞过表达，沉默后相关信号通路与深静脉血栓形成的关系。方法培养人脐静脉内皮细胞行免疫荧光、免疫共沉淀检测，构建人MCP一1细胞系过表达／沉默载体，基因表达谱芯片检测人MCP一1细胞系过表达，沉默后转录谱变化并行生物信息技术分析。结果培养人脐静脉内皮细胞；构建人MCP一1过表达／干扰载体MCP一卜pCDH—G

2、FP／MCP一卜LMPshRNAmir1经病毒转染后感染HUVECs；基因芯片检测发现与正常细胞相比，过表达载体MCP一1一pCDH～GFP转染细胞有18条信号通路下调，7条信号通路上调；干扰载体MCP一1_LMPshRNAmirl转染细胞有60条信号通路下调，15条信号通路上调。结论MCP-1转染人脐静脉内皮细胞后相关信号通路为深静脉血栓疾病分子层面研究提供新的思路，MCP一1可能在深静脉血栓形成发生发展过程中发挥重要作用。【关键词】单核细胞；趋化因子类；内皮，血管；脐静脉；信号传导；静脉血栓形成；单核细胞趋化蛋

3、白一1；人脐静脉内皮细胞【中图分类号】R543【文献标志码】A【DOI】10．3969~．issn．0253—9896．2014．11．001TheStudyofSignalingPathwaysinMCP一1Over—Expression／InterferenceofHUVECsSONGEn，LIGuangdi，ZHOURudan，ZHAOXuelingOrthopedicsDepartmentoftheFirstAffiliatedHospitalofKunmingMedicalUniversity,Kunmi

4、ng650032，ChinaCorrespondingAuthorE—mail：zxldoctor@hotmail．con[Abstract】ObjectiveToinvestigatetheassociationbetweenthesignMingpathwaysofMCP一1一pCDH—GFP—trans-fectedcellsanddeepvenousthrombosis(DVT)．MethodsTheculturedhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)were

5、testedbyimmunofluorescenceandCO—immunoprecipitationmethods．TheconstructedMCP一1over—expression／interfer—encevector，andthechangeoftranscriptionprofileweredetectedbymieroarrayassayandbiologicalinformationtechnologyanalysis．ResultsMCP一1over—expression／interference

6、vectorMCP一1一pCDH—GFP／MCP一1一LMPshRNAmirlwascon—structedandHUVECsweretransfected．Accordingtothemicroarrayanalysiswefoundthattherewere18down—expressedsignalingpathwaysand7up—expressedsignalingpathwaysinMCP一1一pCDH—GFP—transfectedcells．Therewere60down—expressedsign

7、alingpathwaysand15up—expressedsignalingpathwaysintheMCP一1一LMPshRNAmirltransfectedcells．ConclusionSignalingpathwaysofMCP一1playsanimportantroleinDVTformation，whichmayprovideUSanewwaytostudymolecularmechanismofDVT．【Keywords】monocytes；chemotacticfactors；endotheliu

8、m，vascular；umbilicalveins；signaltransduction；venousthrombosis；monoeytechemoattractantprotein一1；humanumbilicalveinendothelialcells单核细胞趋化蛋白(MCP)属于趋化因子家族维细胞、平滑肌细胞等分泌与释放。MCP一1具有诱CC亚族成员