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《斑节对虾白斑综合症杆状病毒(WSBV)的形态和感染的组织病理研究.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、第17卷第4期徐州师范大学学报(自然科学版)Vol.17,No.41999年12月J.ofXuzhouNormalUni.(NaturalSciences)Dec.,1999斑节对虾白斑综合症杆状病毒(WSBV)的形态和感染的组织病理研究周化民(徐州师范大学生物系,江苏徐州221009)摘要:应用光镜和电镜研究斑节对虾白斑综合症杆状病毒(WSBV)的形态和感染的组织病理,结果证实WSBV感染的细胞解体坏死.电镜观察对虾肝胰腺细胞未发现病毒粒子,而鳃上皮细胞和甲壳表皮细胞感染3种杆状病毒,分别称之为细胞质杆状病毒,细胞核Ⅰ型杆状病毒,细胞核Ⅱ型杆状病毒,病
2、毒粒子大小分别为(102～112)nm×(308～326)nm,(98～105)nm×(265～275)nm,(101～112)nm×(391～420)nm.病毒不形成包含体.负染后病毒粒子还可见细端有一乳头状结构,大小约40～50nm,后带有一宽约18nm、长约340nm的尾.关键词:斑节对虾;白斑综合症杆状病毒;形态;组织病理中图分类号:Q947.11文献标识码:A文章编号:1007-6573(1999)04-0059-0470年代以来,由于人工育苗和配合饵料的研究成功,世界范围内出现了养虾热.但是,在对虾人工繁殖、养殖、营养和饲料已得到较好解决的情
3、况下,病害问题就成为对虾养殖业发展的决定因素.近年来,危害斑节对虾(Penaeusmonodon)最严重的病毒性疾病是白斑综合症(WhiteSpotSyndrome,WSS).白斑综合症的流行,使我国1993～1994年对虾绝产面积达50%以上,造成巨大的经济损失,也使亚洲许多国家对虾养殖业遭受巨大的经济损失.白斑综合症的病原体是白斑综合症杆状病毒(WhiteSpot[1～4]SyndromeBaculovirus,WSBV).WSBV的组织病理和流行病学调查已有一些报道,WSBV分离与[5]纯化技术也不断改善.本文对WSBV的形态和组织病理的研究将有助
4、于进一步了解该病毒和它致病的实质,为预防WSBV的感染提供理论依据.1材料和方法1.1材料养成期健康斑节对虾和白斑斑节对虾均取自广东省廉江市龙营围对虾养殖场未发病和发病虾池.1.2光镜观察斑节对虾分别从头胸部和腹部注射Bouin's液固定,整体固定后取头胸部于Bouin's液中4℃保存,按组织切片常规技术酒精脱水,To型透明剂透明,石蜡包埋,HE染色,封片后光镜观察.1.3电镜观察斑节对虾鳃切成0.5cm×0.5cm小块,于2.5%戊二醛溶液(0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液,pH=7.4)中固定,经缓冲液冲洗3×30min,于1%锇酸(0.1mol/L
5、二甲砷酸钠缓冲液,pH=7.4)后固定1.5h,丙酮系列脱水,Epon's812液渗透包埋,包埋块于AO超薄切片机上制成超薄片,经醋酸铀和柠檬酸铅双重染色后,于PhilipsCM10透射电镜下观察.1.4病毒粒子的提纯[6]病毒粒子的提纯方法参见谢数涛改进后的方法进行.取白斑病斑节对虾头胸部于TNbuffer(50mmol/LTris-HCL,pH=7.4,0.4mol/LNaCl)中,用玻璃匀浆器冰浴匀浆,低速离心,去沉淀,上清于20000g离心1h,弃上清,沉淀加少许TNbuffer悬浮,加悬浮液于质量浓度分别为0.1,0.2,0.3,0.4,0.5
6、收稿日期:1999-07-09基金项目:国家自然科学基金资助项目(项目批准号:39670570)作者简介:周化民(1963-),男,安徽无为人,讲师,博士,主要从事水生经济动物病害的研究.60徐州师范大学学报(自然科学版)第17卷kg/L的蔗糖密度梯度上,60000g离心1h,收集蔗糖密度梯度中的病毒带,加TNbuffer稀释,30000g离心30min,沉淀用200μl的TNbuffer悬浮,取少量病毒液用于负染.负染时先滴加样品于铜网上,数分钟后滴加负染液,2min后滴加蒸馏水洗,干燥后电镜观察.2结果2.1WSBV的形态大小电镜观察白斑斑节对虾肝胰
7、腺上皮细胞未发现病毒粒子,鳃上皮细胞和甲壳表皮细胞感染3种杆状病毒.从病毒粒子形态大小,复制,装配,成熟的部位看,分别称之为细胞质杆状病毒,细胞核I型杆状病毒和细胞核II型杆状病毒.细胞质杆状病毒病毒粒子在细胞质中复制、装配和成熟,病毒粒子呈杆状,细长形,一端较细,一端钝圆,也有纺锤形,但数量较少.病毒粒子大小为(102～112)nm×(306～308)nm;核衣壳似子弹形,一端较细,一端较粗,大小为(71～78)nm×(306～308)nm,完整病毒粒子由核心,衣壳和囊膜构成,囊膜为单层单位膜,装配完整的病毒粒子少,无核心的衣壳与囊膜等装配不完整的病毒
8、粒子多,病毒粒子在细胞质中形成区域性堆集,多数位于细胞核附近(图1～2).图1鳃
