对虾白斑综合症病毒rnai的抑制

《对虾白斑综合症病毒rnai的抑制》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、中山大学硕士学位论文对虾白斑综合症病毒RNAi的抑制姓名：肖瑾申请学位级别：硕士专业：水生生物学指导教师：何建国20070609肖瑾中山大学硕士学位论文对虾白斑综合症病毒RNAi的抑制作者：专业：水生生物学指导教师：何建国教授摘要对虾白斑综合症病毒(Whitespotsyndromevirus，wssv)，自1992年爆发以来，已在世界范围内传播开来，给对虾养殖业造成巨大经济损失，至今仍未得到完全控制，是迄今为止危害最为严重的一种对虾病毒，成为目前对虾养殖业可持续发展的主要障碍之一。为了研究其致病机理，以便更有效的防治，本论文

2、用siRNA、dsRNA和几种免疫刺激物，注入凡纳滨对虾(Litopenaeuavannamei)内体，研究siRNA和dsRNA引发的RNAi作用以及非特异性dsRNA可能引起的先天免疫反应。选用WSSV核苷酸还原酶基因小亚基(ribonucleotidereductasesmallsubunit，RR2)和囊膜蛋白VP28基因设计特异性的siRNA：选择WSSVDNA聚合酶基因(DNApolymerase，DNApod，核苷酸还原酶基因小亚基(RR2)、胸苷激酶基因(thymidylatekinase，TK)、衣壳蛋白VP

3、24基因和囊膜蛋白VP28基因设计特异性的长链dsRNA；绿色荧光蛋白基因(greenfluorescenceprotein，GFP)，虾酚氧化酶基因(prophenoloxidase，PO)用来设计非特异性长链dsRNA：几种免疫刺激物分别为poly(I：c)，poly(c：G)，polyC，CU眇7和ODN2006。本实验分为两个部分，分别为siRNA和长链dsRNA介导的RNA干扰。siRNA实验选择9组凡纳滨对虾分别作为实验组和对照组，实验组分别注射siRNA+WSSV病毒液，并于24、36hr分别加注射一次siRNA

4、；PBS和WSSV病毒液作为对照组。观察对虾死亡率并分别在12，24，36，48，72hr采样，进行荧光定量PCR测定病毒量及半定量RT-PCR检测基因表达量。长链dsRNA介导RNAi试验选择13组凡纳滨对虾分别作为实验组和对照组，实验组分别注射dsRNA+WSSV病毒液，免疫刺激物+WSSV病毒液，PBS和WSSV病毒液作为对照组。观察死亡率并分别在6，12，24，铝，72hr采样，进行荧光定量PCR检测病毒量。肖瑾r}1山大学颁Jj学伉论文结果表明，特异性的siRNA能显著的降低目的基因的表达量和WSSV扩增速度，并对延

5、缓对虾死亡时间起到一定作用，效果随着注射量的增加而加强；而非特异性的siRNA对于抗WSSV并无作用。另外，特异性dsRNA能显著降低WSSV扩增量并提高攻毒虾的存活率，保护率达到50％～80％；与siRNA不同，非特异dsRNA也有保护作用，如dsRNA类似物Poly(1：C)及Poly(C：G)，保护牢在40％--50％之间；非特异dsRNA保护串在20％～40％之间；其他免疫刺激物(CL097、ODN2006、PolyC)，保护率在17％左右；定量PCR检测各组病毒量趋势也是一样。由此可见，非特异dsRNA，可能存在引起

6、对虾先天免疫的反应，为研究对虾先天免疫的机制打下基础。关键词：对虾白斑综合征病毒(WSSV)，RNAi，siRNA，dsRNA，凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)Ⅱ肖瑾中山大学硕士学位论文InhibitionofWhiteSpotSyndromeVirusbyRNAiName：XiaoJinMajor：HydrobiologySupervisor：ProLHeJianguoAbstractWhitespotsyndromevirus(wssv)hascausedseveremortalitiesandhuge

7、economiclossestotheshrimpfarmingindustry，notonlyinAsiabutalsogloballysinceitbrokeoutin1992．IthasnotbeenentirelycontrolleduptoROW，andithasbecomeoneofthemainobstacleofshrimpculture．Toelucidatethemechanismofvirespathogenesis，siRNA,dsRNAandimmunestim／datorswereinjectedi

8、ntoLitopenaeusvannameitOstudytheeffectagainstWSSVofgenessilencing．TwospecificsiRNAsincludedtargetsagainstVP28geneandribonucleotidereductas