大鼠乳腺癌癌前病变肝郁肾虚证病证结合模型研究-论文.pdf

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1、第38卷第4期山东中医药大学学报2014年7月JOURNALOFSHANDONGUNIVERSITYOFTCMJu1．2014大鼠乳腺癌癌前病变肝郁肾虚证病证结合模型研究张瑁，李猛，李媛媛，于庆生，李华刚(安徽中医药大学中医临床学院，安徽合肥230031)[摘要]探讨乳腺癌癌前病变肝郁肾虚证病证结合模型的造模方法。方法：SD大鼠分为空白对照组、二甲基苯蒽造模组、二甲基苯蒽+雌激素造模组、二甲基苯蒽+雌激素病证结合模型组，检测不同造模方法大鼠模型乳腺组织雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)表达及上皮生长因子受体(EGFR)及转录激活因子3(STAT3)的

2、蛋白表达。结果：与空白对照组比较，各造模组ER、PR表达增高(尸<0．05)。与二甲基苯蒽组比较，二甲基苯蒽+雌激素组、病证结合组ER、PR表达增高，差异有统计学意义(P<0．05)，病证结合组EGFR、STAR3的表达亦增高，差异有统计学意义(P<0．05)；与二甲基苯蒽+雌激素组比较，病证结合组各项指标表达增高，差异有统计学意义(P<0．05)。结论：EGFR／STAT3通路参与乳腺癌癌前病变的发病。肝郁肾虚在发生过程中起重要作用，病证结合造模具有可行性。[关键词]乳腺癌癌前病变；上皮生长因子受体；转录激活因子3；肝郁肾虚证；大鼠[中图分类号]R2—

3、03[文献标志码]A[文章编号]1007—659X(2014)04．0379-02乳腺癌癌前病变主要指乳腺非典型增生，研究肾虚证的模型制造：二甲基苯蒽一次性灌胃后第4表明在乳腺癌的发生过程中，雌激素促进乳腺上皮周开始，采用宋彩梅等E4]方法，皮下注射氢化可的松细胞分裂增殖效应是通过上皮生长因子(EGF)信号注射液15mg／kg，连续20d行夹尾激惹法及冷水刺转导及转录激活因子3(STAT3)细胞转导通路实现激应激。的l1]。中医认为乳腺不典型增生的发生和肝郁肾虚大鼠40只随机分为4组，空白对照组、单纯二有关。本实验基于EGFR／STAR3信号通路及雌、孕

4、甲基苯蒽造模组、二甲基苯蒽+雌激素造模组、二激素受体变化，探讨乳腺癌癌前病变肝郁肾虚证病甲基苯蒽+雌激素病证结合模型组(病证结合组)。证结合模型的造模方法。1．3’观察项目及方法1材料与方法1．3．1病理组织学观察苏木精一伊红染色(HE)，1．1实验主要材料SD未孕雌性大鼠。安徽省实将乳腺组织标本分为无增生、普通增生、非典型增验动物中心提供(合格证号20030004)；二甲基苯生、导管内癌。蒽(江苏永华化学品有限公司生产，批号20110517)；1．3．2检测不同造模方法的大鼠模型乳腺组织第9苯甲酸雌二醇注射液、黄体酮(武汉远大制药集团有周雌激素受体(E

5、R)、孕激素受体(PR)表达及EGFR、限公司，批号H42021919)：鼠抗人STAT3单克隆抗STAT3蛋白的表达，采用免疫组化SP法。免疫组体、鼠抗人EGFR单克隆抗体(武汉博士德生物科技化染色阳性判断：乳腺导管和小叶上皮细胞核和／有限公司)，SP免疫组化染色试剂盒(北京中杉金桥或细胞浆呈棕黄色着色时为阳性。无阳性细胞表生物科技有限公司)；OlympusBX一50型显微镜(日达者为(一)；阳性细胞率虽不足2O％但局部区域本Olympus光学工业株会社生产)等。有少量较强着色的阳性细胞者为(±)；阳性细胞1．2动物分组及造模方法乳腺癌癌前病变的模率>

6、2O％者依阳性细胞数由少至多、着色由浅至深型制造：参照宋爱莉等~2-3]方法，实验第1天用溶解依次为(+)、(++)、(+++)、(++++)。计算阳性率时有二甲基苯蒽(DMBA)的芝麻油，按lmL／100g给将(±)亦计人阳性范围；并分别计0，1，2，3，4，5分，大鼠一次性灌胃处理，联合雌激素造模组并肌内注积分愈高表明含量愈高。射苯甲酸雌二醇0．5mg／kg。日1次．连续25d后改1．4诊断标准乳腺病理诊断标准参考WHO肿瘤用肌内注射黄体酮4mg／kg，日1次，连续5d。肝郁分类标准。1．5统计学方法实验数据用SPSSl1．0统计软件进行分析，计量资

7、料组问比较采用方差分析，相关关[收稿日期]2013—11-06系分析采用Spearman等级相关分析法，取ct=O．05[基金项目]安徽省教育厅安徽省高等学校省级自然科学研究重点项目(编号：KJ2013Z173)为检验水准。3792014正7山东中医38卷第42结果均以非典型增生为主，少数普通增生，二甲基苯蒽+2．1光镜观察每只大鼠选取一对乳房，每组乳房雌激素造模组及病证结合组见部分导管内癌，见表数为20个，空白对照组全部为正常腺体；各模型组l。表1各组光镜观察病理结果比较(n=20)与二甲基苯蒽造模组比较尸<0．05，与二甲基苯蒽+雌激素造模组比较#P

8、<0．052．2ER、PR、EGFR、STAR3蛋白表达见表2。表2各组ER、P