IL-8及其受体在原发性肝癌中的表达及其意义-论文.pdf

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1、中华临床医师杂志(电子版)2o13年1月第7卷第1期ChinJClinicians(ElectronicEdition)，January1，2013，V01．7，No．1·短篇论著·IL一8及其受体在原发性肝癌中的表达及其意义王吉荣武传星【摘要】目的探讨IL-8及受体在肝癌组织中的表达及其临床意义。方法ELISA检测血清中IL一8表达水平，RT．PCR检测IL-8mRNA及受体CXCR1、CXCR2mRNA的表达水平，免疫组化检测IL一8在肝癌组织中的表达。结果肝癌患者血清【L-8表达明显高于良性肿瘤患者(P<0．0

2、5)。RT-PCR肝癌组织中IL-8mRNA及其受体CXCR1、CXCR2mRNA的表达明显高于癌旁和正常肝组织(尸<0．05)。免疫组化肝癌组织及癌旁组织中IL一8表达均高于正常肝脏组织，且肝癌组织中表达明显高于癌旁组织(P<0．05)。结论IL一8在肝癌组织中高表达，在肝癌的发生发展中起重要的作用，其受体CXCR1、CXCR2mRNA的表达也相应升高，可作为临床诊断的新指标及其治疗的新靶点。【关键词】肝肿瘤；白细胞介素8；免疫组织化学IL--8来源于巨噬细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、肝5．ATrcCCAA

3、AGACCCACTCAT．3；GAPDH上游引物为：5．细胞等，其生物活性是吸引和激活中性粒细胞，促进中性粒细胞GAAGATGGTGATGGGATIT一3，下游引物为：5一CAAGCTYC-趋化、脱落，释放溶酶体，加强炎症保护、促进T细胞趋化游走，CCGTrCTCAGCC-3。采用Trizol试剂提取总RNA，并检测RNA加强免疫反应J。越来越多的实验证明，IL-8及其受体在肿瘤的纯度和浓度。取RNA2l，按照实时PCR试剂盒进行反转录的发生、发展中具有一定的影响和作用。本文拟对IL-8及其反应获得cDNA，并置于一

4、20℃保存、备用。检测IL-8mRNA其配体与肝癌的关系作一初步探讨。受体CXCR1、CXCR2mRNA表达的反应体系共2O，其中DNA一染料SYBRGreenpremixExTaqTMU(2×)1O、引物各0．6l、、资料与方法1．一般资料：32例均为2008年：月至2011年12月本院住cDNA2以及dH206．8ILl，并设置IL-8，CXCR1，CXCR2和院患者，9例为肝良性肿瘤患者(无肝炎肝硬化等肝病基础)，其GAPDH各三个标准品，制作标准曲线判断扩增效率是否一致，余经化验、超声、CT确诊，行肝切除术后

5、病理提示为肝细胞性肝并且每个样品设3个复空；免疫组化：ABC试剂盒分别购自Vec—癌。男l5例，女8例，年龄32～78岁，平均年龄为56．7岁。全tor公司，免疫组化操作步骤按试剂盒说明进行，显微镜下观察部病例均有不同程度的肝病，术前均未接受包括经肝动脉栓塞染色强度，以PBS代替一抗做阴性对照，已知阳性切片为阳性化疗在内的任何其他治疗。对照。2．标本来源：取肿瘤及癌旁约1cm外的肝组织，避开坏死5．统计学分析：采用SPSS13．0统计软件处理，所得结果以区，标本置于液氮中保存，再置于一7O℃冰箱备用。部分用甲醛均数±

6、标准差(±s)表示，进行方差分析。P<0．05为差异有统固定，石蜡包埋，待免疫组化染色。全血于术前抽取6ml，然后计学意义。在4℃下、离心半径为16em、3600r／min离心10min，收集血清，二、结果并置于一80℃保存、备用。1．血清中IL-8细胞因子的水平：原发性肝癌患者血清中3．主要实验试剂及仪器：Trizol试剂购于Invitrogen公司；实IL．8的含量明显高于对照组的患者，两组比较，差异有统计学意时聚合酶链反应(PCR)试剂盒购于TaKaPa公司，IL-8酶联免疫义(尸<0．05，图1)。吸附试验(

7、ELISA)试剂盒购自美国R&D公司。生化检测仪购自2．IL-8在肝癌组织中的表达：免疫组化检测IL-8在肝癌组Olympus公司，ABIprism7300实时PCR仪购自Aplliedbiosystem织中的表达，32例标本中23例肝癌患者癌组织中的表达明显高公司。Anti．IL-8兔抗人多克隆抗体购自SantaCruz公司。于癌旁组织。9例对照组IL．8表达基本为阴性(P<0．05，图2)。4．血清IL一8水平的测定：采用双抗体夹心ELISA法，取3．IL．8mRNA及其配体CXCR1、CXCR2mRNA基因的表

8、一8O℃保存的血清，自然解冻后进行检测，检测步骤严格按照达：原发性肝癌患者癌及癌旁组织中的IL-8mRNA及其配体说明书进行；组织中IL．8mRNA及其受体CXCR1、CXCR2mRNACXCR1、CXCR2mRNA的相对表达量高于正常对照组，组间比表达检测：采用RT—PCR法，IL-8、CXCR1、CXCR2和GAPDH引较，差异有统计学意义