阿托品与乙酰胆碱对豚鼠离体肠平滑肌的作用.doc

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1、阿托品与乙酰胆碱对豚鼠离体肠平滑肌的作用及PA2、PD2测定年级：2006年药学专业学生：苏鹤桂学号：【实验目的】通过离体器官实验，观察药物对M胆碱受体的激动作用和竞争性拮抗作用，加深理解受体的亲和力、内在活性概念以及受体动力学参数KD、pD2、Emax及pA2的计算和意义。【实验意义】1建立方法研究药物拮抗作用2观察药物的拮抗性作用【实验原理】M胆碱受体激动药卡巴胆碱能剂量依赖性地激动肠管平滑肌上的M胆碱胆碱受体，产生平滑肌收缩效应，M胆碱受体阻断药阿托品可竞争性拮抗卡巴胆碱对M胆碱受体的激动作用。通过累积剂量效应曲线，以及曲线直线化方法，可求得受

2、体动力学常用参数。实验材料乙酰胆碱（mol/L）：10-6、10-5、10-4、10-3、10-2阿托品（mol/L）：3´10-7台氏液配制1000ml台氏液含：NaCl8.0g、10%KCl2.0ml(0.2g)、10%MgSO4.7H2O2.6ml(0.26g)、5%NaH2PO4.2H2O1.3ml(0.065g)、NaHCO31.0g、1MCaCL21.8ml（0.2g）、葡萄糖1.0g。离体器官浴池及恒温装置、PowerLab系统、混合气体（95％O2＋5％CO2）、负荷500mg、加液器、培养皿、缝针、线、眼科镊子、剪刀。【实验步骤】1

3、．离体肠肌的制备猛击豚鼠头部至昏，立即剖开腹腔，自幽门下5cm剪取空肠和回肠上段，迅速置于台氏液液中。小心剪去肠系膜，用吸管吸取台氏液液缓慢冲洗肠内容物；将空肠段分割成2cm的小段备用，然后用缝针在肠段两端各穿一根线，作为固定肠肌之用。2．实验装置将制成的标本一端固定于通气钩上，另一端连接于肌力换能器并接入PowerLab系统的桥式放大器上，浴池内放20ml台氏液液，加500mg负荷，恒温37±1°C，浴池内持续通入95％O2与5％CO2的混合气体。3．累积剂量－效应曲线的制作实验装置完毕以后，打开PowerLab系统，按“操作指南”设置参数：（1）

4、选择channel1（2）记录速度10/s（3）BridgeAmplifer中“rang”选择20mv，“LowPass”选择50Hz（4）调零“zero”描记肠肌收缩曲线，待收缩基线平稳后，按下列（表6-2）次序在浴池中加入预先配好的不同分子浓度的乙酰胆碱。表6-2累积剂量法加药顺序累加次序药液浓度（mol/L）药液的毫升数（ml）每L中累积剂量（mmol）110-60.20.01210-60.40.03310-50.140.1410-50.40.3510-40.141610-40.43710-30.1410810-30.430910-20.141

5、001010-20.4300随药液的依次加入，浴池内药物浓度不断提高。每加入一个剂量后，约经数秒钟肠肌的收缩达高峰。应在高峰未下降前，迅速加入下一个剂量。当反应到一定高峰，再递增剂量，效应不再增加，此时的效应为最大效应。4．阿托品拮抗乙酰胆碱的剂量－效应曲线的制作放去浴池中的液体，用台氏液液冲洗三次，以后每隔10min冲洗一次，共冲洗三次，再加入台氏液液至20ml。待收缩基线平稳后，加入阿托品3X10－7mol/L0.2ml，培育15min，再按“方法3”依次加入不同浓度的乙酰胆碱，便可得到有拮抗剂时乙酰胆碱的累积剂量效应曲线，此时拮抗剂（阿托品）摩

6、尔浓度的负对数即pAx。【统计与处理】1．绘制累积剂量效应曲线取方格纸，以肠肌收缩幅度（mv）作为纵坐标即效应（E），以药物对数浓度（lgC）为横坐标，绘制量效曲线。KD值即达到50％最大效应时，在横坐标上所对应的药物浓度。药物的最大效应（Emax）即曲线的高度。当比较同类药物的Emax时，即比较曲线的高度（肠肌收缩最大幅度）。2．直线回归（LR）计算参数为了正确求得各参数，必须将曲线直线化。可按D/R式（改良Lineweaver－Burk式）使剂量效应曲线直线化。(y)(a)(b)(x)式中：D为药物剂量（浓度），E为某一剂量的效应，KD为药物的解

7、离常数，Emax为药物的最大效应。以[D]/E为纵坐标，[D]为横坐标进行直线回归。按直线公式y=a+bx，则－LogKD即pD2根据公式pA2=pAx+log(x-1)，式中pAx为拮抗剂摩尔浓度的负对数，x为用拮抗剂后与用拮抗剂前KD之比。【实验结果】C(mol/l)lgcE（乙酰胆碱)E(乙酰-1.95）E（+阿托品)E2（阿托品-1.12）C/E(乙酰胆碱-1.95）C/E2（+阿托品-1.12）10-5-53.371.421.470.357.04X10-62.86X10-53X10-5-4.53.621.671.610.491.79X10-

8、56.12X10-510-4-44.152.21.720.64.54X10-51.67X10-43X10-4