第十四章 基因诊断

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1、第十四章基因诊断第一节概述一、什么是基因诊断所谓基因诊断，就是在基因水平上对疾病或人体的状态进行诊断，它包括产前诊断，是一种新的临床诊断方法。是以DNA和RNA为诊断材料，利用分子生物学技术，通过检查基因的结构或表型来诊断疾病的方法和过程；其临床意义在于能检测DNA或RNA的结构变动与否，量的多少及表达情况等，以确定被检查者是否存在基因水平的异常变化，以此作为疾病确诊或进行基因治疗的依据。二、基因诊断的概念界定以下6个方面内容：（一）诊断水平基因水平（二）诊断技术从方法学来说，没有特殊的基因诊断方法，就是分子生物学技术在临床上的应用。（三）诊断材料DNA和RNA。（四）

2、诊断内容1、对于内源性基因来说：基因结构和表达是否异常。2、对于外源性基因来说：入侵基因的种类，是病毒核酸、细菌质粒还是寄生虫DNA.（五）诊断途径1、直接检查基因结构是否存在：DNA点突变、缺失插入、基因重排、染色体畸变、mRNA剪接缺失错位或结构变化等。2、检查基因转录产物mRNA：1）已经转录还是没有转录？2）应该转录还是不应该转录？3）转录正常、过量还是过少？3、检查基因表型：正常还是异常，进行分析研究。（六）诊断目的1、确诊相应疾病或得出相应结论。2、是防治疾病或基因治疗的根据。三、基因诊断的思路（一）基因是随便能诊断的吗？总不能乱诊断吧？（二）基因诊断和传统

3、的疾病诊断方法有什么区别和联系？（三）基因诊断的理论基础和技术能不能诊断诊断学基础怎样诊断？为此，作下述讨论。希望对大家有所帮助。四、基因诊断方法和传统的疾病诊断方法表1表型诊断（传统方法）基因诊断（一）诊断依据疾病表型变化基因结构异常和表达异常（二）分类临床诊断（病因、病解、病生）DNA诊断血清学诊断RNA诊断生化学诊断（三）特异性表型改变在很多情况下是非特以探测基因为目标，只要异性的，往往难以明确诊断，有特异性探针，利用分子延误病情如FOU?杂交原理即可诊断，具有很高的特异性。（四）敏感性探针可用“放标”或“非放诊断灵敏度高，标本只需微量，DNApg水平即可。（五）

4、早期诊断因为表型改变往往出现较晚，在表型改变之前，基因难以早期诊断结构或表达已发生改变，故往往可以早期诊断。（六）基因诊断范围广因为：①探针可为任何来源和种类，序列可为已知或未知，目标可为特定基因或特定基因组合，外源性或内源性基因，所以适应性强，诊断范围广。②被检查基因是否处于活化状态并不重要，故可对分化阶段表达特异性基因及其异常进行检测和诊断，这对肿瘤（如CML）疗效及预后尤为重要。③在感染性疾病的诊断，能检查正在生长或潜伏病原体，能明确既往感染或现行感染，对不易诊断（如产毒性E.coli）和不能安全培养（如立克次体）进行基因诊断，扩大了实验室诊断范围。（七）二者关系

5、1.基因诊断必须建立在临床一般检查的基础上，它必须是临床检查的第二步或第三步手段。（不是随便诊断）2.基因诊断是分子生物学和医学遗传学发展到今天人们的一种设想，现在逐步走向临床，变成现实。3.尽管实验研究和临床应用技术原理相同，但诊断对象是人的时候应该慎重！（不能乱诊断）4.同临床诊断一样，忌不独立思考，人云亦云（举例）。细胞膜细胞核DNAmRNA转录翻译（protein）临床表现基因诊断生化诊断血清学诊断临床诊断图一基因诊断与表型诊断（五）基因诊断与诊断学（一）诊断是用医学科学的方法对疾病的表现所作出的辩证逻辑的结论。诊断目的：为了防御疾病和进健康。（二）诊断学是论述

6、诊断疾病的基本原则和方法的一门课程。其基本原则就是研究症状体征发生的基本规律和机理以及建立诊断的思维程序。基本诊断方法包括：询问病史、体检、实验室检查、以及其他检查如：心电图、超声检查、内窥镜、CT、核磁共振等等。（三）基因诊断是诊断学的续写，是诊断学的新篇章，从这个意义上来说：基因诊断遵循诊断学的基本原则；基因诊断的基础是医学基础，专业基础是医学分子生物学和医学遗传学，不同的是我们在基因水平上，学习和研究：基因解剖（结构）、基因生理（转录翻译等）、基因病解（结构异常），基因病生（表达异常），然后主要应用分子生物学技术手段进行基因诊断。（六）基因诊断的思维程序：第一套：

7、逆向遗传学（reversegenetics）思维程序1.提取人类基因组（总）DNA；2.建立DNA文库（DNABANK）；3.克隆任一DNA片段作为探针。4.确立该探针在基因组中的位置；这种探针在基因组中的位置一旦被确定下来，就可以成为遗传标记（geneticmarker）.5.大量应用此类新的遗传标记(用染色体步移法或染色体跳跃法)建立各条染色体的连锁基因图谱，最终建立整个人类的基因图谱。6.筛选遗传病病人或疑有与基因有关的疾病的病人；7.克隆病变基因8.比较正常基因和异常基因的差别推测正常异常基因产物（蛋白质）在细胞中定位以及生理病理