微生物学实验操作大全.doc

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1、《微生物学》实验指导书《微生物学》实验指导书26《微生物学》实验指导书目录实验一培养基的配制实验二消毒与灭菌实验三显微镜油浸系物镜的使用实验四细菌形态的观察实验五细菌的革兰氏染色实验六放线菌的形态观察实验七酵母菌的形态观察实验八霉菌的形态观察实验九细菌数量的测定(设计性实验)实验十微生物的接种方法26《微生物学》实验指导书实验一培养基的配制一、实验目的和内容目的：学习和掌握配置培养基的一般方法和步骤内容：1、牛肉膏蛋白胨的配制2、高氏1号培养基的配制3、马丁氏培养基的配制二、实验材料和用具牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡萄糖、孟加拉红、链霉素、1mol/lN

2、aOH、1mol/lHCl、KNO3、NaCl、K2HPO4*3H2O、MgSO4*7H2O、FeSO4*7H2O。试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、线绳、纱布三、操作步骤（一）牛肉膏蛋白胨培养基的配制牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普遍的细菌基础培养基。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，琼脂15~20g，水1000ml，pH7.4~7.61、称药品按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯或表面皿中称量，用热水溶解后倒入大烧杯，牛肉膏极易吸潮，故称量时要迅速。2、加

3、热溶解在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入已溶解的药品中，再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补足所失水分。3、调pH检测培养基的pH，若偏酸，可滴加1mol/lNaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH范围。若偏碱，则用1mol/lHCl进行调节。PH的调节通常放在加琼脂之前。应注意pH值不可调过头，以免调回影响培养基内各离子的浓度4、过滤液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4层纱布趁热过滤，以利结果的观察。但是

4、供一般使用的培养基，这步可以省略。26《微生物学》实验指导书5、分装按实验要求，可将配制的培养基分装入试管或三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上而造成污染。分装量：固体培养基约为试管高度的1/5，灭菌后制成斜面。分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜。半固体培养基以试管高度的1/3为宜，灭菌后垂直待凝。6、加棉塞试管口和三角瓶口塞上用普通棉花（非脱脂棉）制作的棉塞，棉塞制作方法如图1—1。棉塞的形状、大小和松紧度要合适，四周紧贴管壁，不留缝隙，才能起到防止杂菌侵入和有利通气的作用。要使棉塞总长约3/5塞入试管口或瓶口内，以防棉塞脱落。有些微生

5、物需要更好的通气，则可用8层纱布制成通气塞。有时也可用试管帽或塑料塞代替棉塞。7、包扎加塞后，将三角瓶的棉塞外包一层牛皮纸或双层纸，以防灭菌时冷凝水沾湿棉塞。若培养基分装于试管中，则应先把试管扎成捆后，再于棉塞外包一层牛皮纸。然后用记号笔注明培养基名称、组别、日期。8、灭菌将上述培养基于121.3℃湿热灭菌20min。如因特殊情况不能及时灭菌，则应放入冰箱内暂存。9、摆斜面灭菌后，如制斜面，则需趁热将试管口端搁在一根长木条上，并调整斜面，使斜面的长度不超过试管总长的1/2。10、无菌检查将灭菌的培养基放入37℃温箱中培养24~48h，无菌生长即可使用。或储存于冰

6、箱或清洁的橱内，备用。（二）高氏一号培养基的配制高氏一号培养基是用于分离和培养放线菌的合成培养基。其配方如下：可溶性淀粉20g，KNO31g、NaCl0.5g、K2HPO4*3H2O0.5g、MgSO4*7H2O0.5g、FeSO4*7H2O0.01g，琼脂15~20g,水1000ml，pH7.4~7.6。1、称量和溶解先计算后称量，按用量先称取可溶性淀粉，放入小烧杯中，并用少量冷水将其调成糊状，再加入至少于所需水量的沸水中，继续加热，边加热边搅拌，至其完全溶解。再加入其他成分依次溶解。对微量成分FeSO4*7H2O可先配制成高浓度的储备液再加入，方法是先在10

7、0ml中加入1g的FeSO4*7H2O，配成浓度为0.01g/ml的储备液，再在1000ml培养基中加入以上储备液1ml即可。待所有药品完全溶解后，补充水分到所需的总体积。如要配制固体培养基，其琼脂溶解过程同牛肉膏蛋白胨培养基配制。26《微生物学》实验指导书2、pH调节、分装、包扎、灭菌及无菌检查同牛肉膏蛋白胨培养基的配制（三）马丁氏培养基的配制马丁氏培养基是用于分离真菌的选择培养基。其配方如下：K2HPO41g、MgSO4*7H2O0.5g，蛋白胨5g，琼脂15~20g，水1000ml，自然pH。1、称量和溶解先计算后称量，按用量先称取各成分，并将其溶解在少于

8、所需量的水中。待各成分完