微生物学实验操作规范说明

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1、微生物学实验操作规范说明一、普通光学显微镜的正确使用方法1、遵循“低倍镜→高倍镜→油镜”的原则；2、利用同焦现象进行聚焦：装上待观察的玻片后，将低倍镜（4倍镜）转换到工作位，用粗调节将载物台上升到最高，再用粗调节反方向调节，初步聚焦后再用细调节聚焦，将目标物调到视野中心后才能转换10倍镜到工作位，此时将出现同焦现象，即不需要调节视野中就有目标物的模糊影像；紧接着就可以只通过细调节就可以聚焦，此后不允许再用粗调节进行聚焦，避免粗调节的误操作压迫玻片，损坏镜头；在10倍镜下聚焦后，又将目标物移到视野正中间，然后转换

2、40倍镜头到工作位，继续利用同焦现象用细调节进行聚焦；聚焦后将目标物移到视野正中间，装上油镜，在不动载物台高度，也不拿下玻片的情况下用胶头滴管滴加香柏油，然后将油镜转换到工作位，利用同焦现象用细调节进行聚焦。3、聚焦注意事项：（1）初步聚焦后不允许再使用粗调节进行聚焦；（2）每次转换镜头之前，物象应该是最清楚的，而且应该将目标物移到视野正中心，否则可能不出现同焦现象；（3）记得再使用40倍镜和油镜前，检查镜头是否干净，若有堵塞或香柏油，应该用二甲苯进行擦拭。4、显微镜使用后的处理：（1）关掉电源，拿下玻片，用洗

3、衣粉清洗干净后放入75%酒精瓶中浸泡；（2）卸下油镜，将油镜用二甲苯擦拭干净后装回塑料套中，放回干燥器中进行保管；（3）擦拭显微镜上的灰尘或油迹，将剩余的镜头摆回“八”字位；（4）在登记本上记录使用情况后，套上布套，将显微镜放回柜中。二、无菌器材的准备1、微生物实验过程中使用的各种器材均需要进行严格的灭菌。2、培养皿的包扎和灭菌：（1）培养皿应该干净干燥，一砸八个到十个，要按一致方向进行摆，用报纸进行包扎，要求培养皿全部包住，没有露出来的，两端报纸叠痕整齐美观，包好后用棉线进行捆绑，方便拎取；（2）培养皿也可以

4、用专门的金属器皿进行包装；（3）培养皿灭菌可以采用干热灭菌，灭菌条件：160~170℃，1~2h；也可以采用高压蒸汽灭菌，条件121℃20min；（3）灭菌后的培养皿应该放到烘箱进行干燥，干燥温度105℃，时间视情况而定，尽量多烘一段时间，保证干透，以免培养出来的菌落生长不规则；（4）烘干的培养皿在使用之前不应该打开包装；（5）在无菌室进行杀菌时，可以将烘干的培养皿放到无菌室或超净工作台上，连同无菌室一起进行消毒；（6）使用时，打开无菌培养皿，应该让培养皿一叠盖子在上底在下，一个方向放好。3、移液管的包扎和灭菌

5、：（1）移液管在包扎前也应该是干燥的，若有水，应该进行干燥或者用力将水甩干净；（2）应该在移液管尾端塞入一截棉花，起到过滤空气阻留杂菌的作用；棉花应该是完整的一截，而不应该几截拼在一起；松紧应该合适，可以用牙签帮助塞棉花；塞完后，尾端不能有棉花丝露在外面，可以用酒精灯快速灼烧外面的棉花丝；（3）将塞好棉花的移液管按照不同量程规格分开包扎，可以一支一支包，也可多支一起包；（4）包扎时，应该先包管尖，打结在尾端，这样可以避免使用时错将管尖拆出来；（5）灭菌和烘干要求同培养皿；（6）使用移液管时，拆开包装，应从打结一

6、段开始，避免手碰到刻度以下的部位。4、移液枪及枪头的灭菌：（1）移液枪有大小不同的量程，不同的量程要配不同规格的枪头；（25）移液枪不能放在高热下灭菌，不能放在烘箱或者杀菌锅中杀菌，只能用酒精擦拭表面，然后放在无菌台上进行照射消毒；（3）枪头在包扎前应该检查是否有水，有水的要甩干，然后放在合适规格的小盒中摆好，再将小盒包好，放进杀菌锅中进行杀菌；（4）杀完菌的枪头一定要冷却后才能使用，否则枪头温度过高，在使用时容易被捅弯；（5）枪头是可以重复灭菌使用的，用完的枪头不应该丢弃；（6）使用移液枪使应注意调节刻度，需

7、要移取多少调到多少；使用时注意掌握力度，力度不能过大，刚好感觉到阻力时就应该停止下压，否则，移取的体积将不准确。5、试管的包扎和灭菌：（1）试管要配上合适大小的塞子；使用棉塞时严禁将试管倾倒；（2）多支试管包扎在一起时，应该用烧杯承托，而不能直接将多支试管包在一起，因为试管越多越不容易捆紧。极有可能因为其中一根松动，造成其他试管全部松动跌落而摔烂；（3）用烧杯承托试管安全得多，只需将试管连同烧杯口包扎起来就可以了。6、三角瓶的包扎和灭菌：三角瓶也应该配上合适大小的塞子，用牛皮纸包好瓶口。三、高压杀菌锅的使用方法

8、（针对本实验室所使用的杀菌锅）1、正确的操作流程：检查水位→加水→摆放物品→盖锅盖→接通电源→设置杀菌温度和时间→点击“work”工作按钮→杀菌（升温→保温→降温）→切断电源→开盖取出物品2、操作注意事项：（1）加水不可过多，不超过锅内平台，避免浸湿物品；（2）每次杀菌前一定要检查水位；（3）盖锅盖时应该对称拧紧三对螺母，避免一顺操作造成盖子一边紧一边松，不平衡而漏气；（4）盖完盖子后