干预GPC-3基因转录对高转移潜能肝癌细胞增殖的抑制作用-论文.pdf

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1、·2544·中华医学杂志2014年8月26日第94卷第32期NatlMedJChina，August26，2014，V01．94，No．32．基础研究．干预GPC．3基因转录对高转移潜能肝癌细胞增殖的抑制作用姚敏王理时运钱琦蔚丹丹时杨陆少林姚登福【摘要】目的探讨特异性磷脂酰肌醇蛋白多糖3(GPC一3)小发夹RNA(shRNA)转染对高转移潜能肝癌细胞增殖和肝癌生长的抑制作用。方法将构建与筛选GPC-3shRNA最有效序列转染MHCC-97H细胞，以荧光定量聚合酶链反应(PCR)或Western印迹分析mRNA或蛋白表

2、达；以5一乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、划痕和Transwe11试验评估肝癌细胞增殖、迁移和侵袭能力；以Caspase—Glo~3／7荧光法分析细胞凋亡；以裸鼠移植瘤观察对肝癌形成与生长的影响，免疫组化分析瘤组织GPC一3、3-环连蛋白(catenin)、p-GSK313及细胞周期蛋白(cyclin)D1表达。结果shRNA质粒转染MHCC-97H细胞效率>舳％，GPC-3tuRNA下降75．6％(t：15．473，P<0．001)，蛋白表达受抑；细胞增殖抑制71．1％(t=10．468，P<0．001)、迁移

3、抑制80．1％(t=32．697，P<0．001)与侵袭抑制69．1％(t=39．647。P<0．001)；8．cateninmRNA抑制67．7％(t=18．4，P<0．001)；Gli1mRNA上调53．3％(t=一4．824，P=0．008)；干预组裸鼠肿瘤形成平均11．2d，显著长于阴性组5．5d和空白组5．3d(P<0．001)，瘤体积65．5mm明显小于空白组404．8mm和阴性组365．7mm(P<0．001)；且瘤组织GPC-3、~-catenin、P—GSK313及cyclinD1等信号分子表达显著

4、下调(P<0．01)。结论干预GPC一3转录抑制肝癌细胞增殖、迁移和肿瘤生长，提示GPC一3为潜在的肝癌治疗分子靶目标。【关键词】癌，肝细胞；磷脂酰肌醇蛋白多糖3；基因沉默；裸鼠；移植瘤Interventionofglypican-3genetictranscriptiononanti-proliferativeeffectofhepatomacellswithhimetastaticpotentialityYaoMin，WangLi，肌Yun，QianQi，YuDandan，鼢，“Shaolin，YapDengl~

5、．ResearchCenter0厂ClinicalMedicine，NantongUniversity，Nantong226001，ChinaCorrespondingauthor：YapDeng~，EmaiZ：yaodf@ahnmc．com【Abstract】ObjecfiveToexplorethesilencingglypican-3(GPC一3)genetranscriptionbyspecificsmallhairpinRNAfshRNA)ontheinhibitionofhepatomacellswith

6、highmetastaticpotentialityandhepatomagrowth．MethodsAfterMHCC-97Hcellswere~ansfectedwithhigherefectiveGPC一3一shRNA，GPC．3mRNAwasanalyzedbymultipleFG．RT．PCRorproteinbyWestelnblot．Cellproliferationwasdetectedby5-ethynyl一2deoxyuridineandsulforhodamineBassay．itsmigrat

7、orymetastasisandinvasivenessbywoundhealingortranswellchambersystemandcellapoptosiswasdetectedbyCaspase—Glo3／7Luminescenceassay．NudemiceweresubcutaneouslyinjectedwithstableMHCC_97Hcellsforobservingtheformingtimeorvolumeofxenografttumors．AndtheexpressionsofGPC．3，

8、B．catenin，p-GSK3BandCyclinD1wereanalyzedbyimmunohistochemistry．ResultsAftershRNA1transfectionwithhigheficiency(>80％)．theexpressionofGPC．3wasdown．regulatedto75．6％(t=15．473，P<