抗AFP抗体在细胞毒性T细胞抗肝癌中的作用-论文.pdf

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1、细胞与分子免疫学杂志(ChinJCellMolImmuno1)2014，30(4337·论著·文章编号：1007—8738(2014)04—0337—05纳米微粒偶联抗OX40／抗AFP抗体在细胞毒性T细胞抗肝癌中的作用陈明水一，欧阳海超，周山勇，李洁羽一，叶韵斌’(福建医科大学教学医院，福建省肿瘤医院肿瘤免疫学研究室，福建福州350014；福建省肿瘤转化医学重点实验室，福建福州350014；中国科学院福建物质结构研究所，福建福州350000)[摘要]目的探讨乳酸．羧基乙酸共聚物(PLGA)制备的纳米微粒偶联抗OX40及抗AFP抗体(抗OX4

2、0／抗AFP．NP)对甲胎蛋白AFP瑚一。抗原肽特异性细胞毒性T细胞(CTL／AFP一)体外杀伤肝癌细胞的影响。方法用溶剂蒸发法制备纳米微粒(NP)，并与抗OX40和抗AFP共价偶联。用扫描电镜观察所制得PLGA—NP纳米颗粒的形态；ZetaPlus粒度测定仪检测纳米微粒的粒径及电荷；用BCA蛋白定量方法检测纳米微粒偶联抗体的效率；用人外周血单核细胞诱导形成树突状细胞(DC)，用AFPl58一l66抗原肽负载DC诱导AFP特异性的CTL／AFPl58一；分别用2一(4-碘苯)-3-(4硝基苯)_5-(2，4-磺苯基四氮唑)-2H一四唑单钠盐．

3、1法(wsT-1)法、ELISA及乳酸脱氢酶(LDH)法分别检测抗OX40／抗AFP-NP对CTL／AFPl58—166细胞增殖能力、分泌IL-2和IFN．^v及杀瘤活性的影响。结果所制得的PLGA-NP为圆形，大小较均一，粒径约为(300±42)am，带负电荷，约为．(25．124-5．34)mV。蛋白定量显示每mg的PLGA．NP偶联约100g抗体，偶联效率为25％；增殖和活化实验显示偶联有抗OX40的纳米微粒能显著刺激CTL的增殖、IL一2和IFN一的分泌；杀伤实验显示，抗OX40／抗AFP-NP能显著增强AFP特异性CTL／AFP一。

4、66细胞对HepG2细胞特异性杀伤作用，而对SMMC-7721杀伤作用无明显效果。结论抗OX40／抗AFP-NP能刺激CTL／AFP一。细胞的增殖、细胞因子的分泌并增强CTL／AFP细胞对AFP阳性肝癌细胞的特异性杀伤作用。[关键词]纳米微粒；肝癌；细胞毒性T细胞；HepG2；OX40[中图分类号]R735．7，R392．11，Q279[文献标志码]AEfectofPLGAnanoparticlesconjugated、thanti-OX40／anti-AFPmAbsoncytotoxicityofCTLcellsagainsthepatoc

5、ellularcarcinomaCHENMingshui一，OUYANGHaichao，ZHOUShanyong，LIJieyu一，YEYunbin，TeachingHospitalofVujianMedicalUniversity，LaboratoryofImmuno—Oncology，FujianProvincialTumorHospital，Fuzhou350014；FujianProvincialKeyLaboratoryofTranslationalCancerMedicine，Fuzhou350014；StateKeyLabora

6、toryofStructuralChemistry，FujianInstituteofResearchonStructureofMatter，ChineseAcademyofSciences，Fuzhou350000，China[Abstract]ObjectiveToevaluatetheefectofanti-OX40andanti-AFPantibodiesconjugatedontopoly(DL-lactide-co—glycolide)-nanopadicles(PLGA·NPs)onthecytotoxicactivityofA

7、FP158—166-specificcytotoxicTlymphocyte(CTL)againsthepatocellularcarcinomacels／nvitro．MethodsPLGA-NPswerepreparedbyoil-in-watersingleemulsionsolventevaporationmethodandcovalentlyconjugatedwithanti-OX40andanti-AFPrnonoclonaIantibodies．Scanningelectronmicroscopy(SEM)wasutilize

8、dforthecharacterizationofthesurfacemorphologyandestimationofthesizeofthePLGA-NPs．T