低相对分子质量肝素对人肝癌细胞生长的影响及机制-论文.pdf

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1、上海交通大学学报(医学版)Vo1．34No．2Feb．2O14JournalofShanghaiJiaoTongUniversity(MedicalScience)·149[文章编号]1674．8I15(2014)02．0149．05·论著·低相对分子质量肝素对人肝癌细胞生长的影响及机制于北凯。程龙，翟玮玮。史维维，武文娟。(蚌埠医学院1．临床检验诊断学实验中心，2．生物化学与分子生物学教研室，蚌埠233030)[摘要]目的探讨低相对分子质量肝素(LMWH)对体外培养人肝癌细胞SMMC-7721增殖、细

2、胞周期分布及周期调控相关基因Skp2和c—Myc表达的影响。方法体外培养SMMC．7721细胞，经不同浓度LMWH作用不同时间后，MTT比色法检测细胞存活和生长情况。将对照组和LMWH处理组(400、800IU／mL)细胞培养36h后，流式细胞术检测细胞周期分布情况；RT—PCR检测细胞Skp2、c—MycmRNA表达的变化；Westernblotting检测skp2、c．Myc蛋白表达的变化。结果与对照组相比，经LMWH作用后SMMC．7721细胞的生长受到抑制，且在一定范围内呈药物浓度和时间依赖关系

3、；细胞周期分布发生变化，随LMWH剂量增加，s期细胞比例显著下降(P<0．05)，G。／G期细胞比例显著上升(P<0．05)；同时，Skp2、c—Myc的mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性降低(P<0．05)。结论LMWH可抑制SMMC一7721细胞的生长，其机制可能与降低Skp2、c—Myc的表达，阻滞细胞于G。／G。期，从而降低细胞增殖指数有关。[关键词]低相对分子质量肝素；肝癌；增殖；细胞周期[DOI]10．3969／j．issn．1674．8115．2014．02．005[中图分类号]R735

4、．7[文献标志码]AEffectsoflowmolecularweightheparinonproliferationofhumanhepatocacinomacellsanditsmechanismYUBei—kai，CHENGLong’，ZHAIWei．wei，SHIWei．wei，WUWen—juan，rJ．ResearchCenterofClinicalLaboratoryScience，2．DepartmentofBiochemistryandMolecularBiology，BengbuMe

5、dicalCollege，Bengbu233030，China)【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsoflowmolecularweightheparin(LMWH)onproliferationandcellcycledistributionofhumanhepat0cacinomacelllineSMMC-7721cuhuredinvitro，andexpressionsofSkp2andc—Mycrelevanttocycleregulation．M

6、ethodsSMMC-7721cellswereculturedinvitrothentreatedbyLMWHofdifferentconcentrationsfordifferentperiodsoftime．ThenthecellsurvivalandgrowthweredeterminedbyMTTassay．AftercellsofnegativecontrolgroupandLMWHtreatedgroups(400IU／mLand800IU／mL)wereculturedfor36h，th

7、ecellcycledistributionswereanalyzedbyfloweytometry；alterationsofSkp2andc-MycmRNAwereexaminedbyRT—PCR；andexpressionaherationsofSkp2andc-MycproteinswereinvestigatedbyWesternblotting．ResultsComparedtonegativecontrolgroup，thecellproliferationofLMWHtreatedgro

8、upswasinhibitedandpresenteddose·-dependentandtime-dependentwithinacertainrange．ThecellcycledistributionsaheredandwiththeincreasingofLMWHdose，thepercentofcellsinSphasedecreased(P<0．05)andG0／Glphaseincreased(P<0．05)．Inadditi