安捷伦液相常见问题.doc

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1、HPLC故障排除症状类型可能的原因解决方案基线噪声大随机性-污染物积聚冲洗柱;净化样品;使用HPLC级溶剂连续性-检测器灯故障更换紫外灯(寿命为1000小时)偶然性-外部电气干扰使用LC系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6双峰样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相滤芯堵塞更换并使用0.5μm孔隙率的在线过滤器柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部柱上样品超载使用更高负载量的固定相;增加色

2、谱柱内径;减少样品量单峰-存在干扰性组分净化样品;预分离拖尾峰开始出双峰请参见双峰存在未扫的死体积减少接头的数量;确保进样器密封垫紧密;确保接头正确固定碱性化合物-硅醇相互作用换成聚合物固定相HPLC故障排除症状类型可能的原因解决方案基线噪声大随机性-污染物积聚冲洗柱;净化样品;使用HPLC级溶剂连续性-检测器灯故障更换紫外灯(寿命为1000小时)偶然性-外部电气干扰使用LC系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6双峰样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相滤芯堵

3、塞更换并使用0.5μm孔隙率的在线过滤器柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部柱上样品超载使用更高负载量的固定相;增加色谱柱内径;减少样品量单峰-存在干扰性组分净化样品;预分离拖尾峰开始出双峰请参见双峰存在未扫的死体积减少接头的数量;确保进样器密封垫紧密;确保接头正确固定碱性化合物-硅醇相互作用换成聚合物固定相HPLC故障排除症状类型可能的原因解决方案基线噪声大随机性-污染物积聚冲洗柱;净化样品;使用HPLC级溶剂连续性-检测器灯故障更换紫外灯

4、(寿命为1000小时)偶然性-外部电气干扰使用LC系统专用稳压器样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6双峰样品量过大进样量应为流动相进样量的1/6进样溶剂过强使用较弱的进样溶剂或流动相滤芯堵塞更换并使用0.5μm孔隙率的在线过滤器柱有空隙或气沟用玻璃珠或填料填充空隙;重填柱进样器流路不通畅更换进样器转子柱头有空隙使用填料或玻璃珠填充柱顶部柱上样品超载使用更高负载量的固定相;增加色谱柱内径;减少样品量单峰-存在干扰性组分净化样品;预分离拖尾峰开始出双峰请参见双峰存在未扫的死体积减少接头的数量;确保进样器密封垫紧密;

5、确保接头正确固定碱性化合物-硅醇相互作用换成聚合物固定相碱性物质-硅醇相互作用使用更强的流动相或添加竞争碱(例如,三甲胺)硅胶基-柱降解使用特种色谱柱;聚合物柱或空间位阻峰展宽进样量过大降低进样溶剂的强度以集中溶质进样阀中的峰扩散在进样前/后引入气泡以减少扩散数据系统的采样速率过低增大采样检测器时间常数低调节时间常数使之与峰宽匹配流动相粘度过高提高柱温检测器流通池容积过大使用尽可能小的池容积(系统中无热交换器)注射器体积过大减少进样量保留时间长使用梯度洗脱或较强的流动相压力波动单向阀泄漏更换单向阀泵密封垫泄漏更换泵

6、密封垫微粒积聚过滤样品；在线过滤器;过滤流动相压力渐增微粒积聚过滤样品；在线过滤器;过滤流动相水/有机系统-缓冲液沉淀测试缓冲液-有机混合物;确保兼容性保留时间超出总渗透体积体积排阻-特异性相互作用添加流动相改性剂或更改溶剂柱温不断变化保留时间不断变动使柱恒温;绝缘;保证实验室温度恒定平衡时间不足以适应梯度洗脱要求,或梯度洗脱流动相起变化确信在溶剂改变或梯度结束后至少10个柱容积通过色谱柱流动相组分选择性蒸发减少氦气的剧烈脱气;保持溶剂贮器盖好;制备新的流动相缓冲能力不足用>20mM浓度的缓冲液在线流动相混合不一致

7、保证梯度系统输送恒定组成;与手动制备流动相核对污染积聚冲洗色谱柱以去除污染物最初几次进样-吸附在活性部位用浓样品进样冲洗柱,使其处于正常状态保留时间逐渐缩短流速在增加检查泵以确保正确;否则需重调柱上进样超载减少样品键合固定相的流失保持流动相pH值在2-8.5间保留时间逐渐增加流速在减慢解决液流中的漏液现象,更换泵密封垫,检查泵的涡流和气泡硅胶填料的活化点使用流动相改性剂键合固定相的流失保持流动相pH值在2-8.5间流动相组成在变化确保流动相容器盖好硅胶填料的活化点流动相中加竞争碱硅胶填料的活化点固定相用更高覆盖度的

8、填充料灵敏度问题峰位于检测器线性范围之外稀释或浓缩使之处于线性区内最初几次进样-样品在样品池或柱中被吸附;自动进样器;流路阻塞用浓样品处理样品池/柱自动进样器流路阻塞检查流量情况,确保无阻塞现象进样器样品定量管未充满确保样品池中已充满样品在样品制品时有关的样品流失用内标法在制备样品,优化样品制备方法柱平衡时间减慢（离子对现象）长链离子对试剂平衡时间慢使用较短