输血前配合性试验技术

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1、输血前配合性试验技术主要内容一、ABO和Rh血型鉴定二、抗体筛选和鉴定三、交叉配血试验四、抗人球蛋白试验五、血小板输注前的抗体检测及配合试验六、血浆输注前配合试验输血风险免疫反应输血传播疾病红细胞白细胞血小板血浆︳乙肝丙肝艾滋病HTLV/ICMV其它急性溶血反应迟发性溶血反应FNHTR输血相关急性肺损伤TA/GVHDPTPPTR荨麻疹过敏性休克/死亡血型定型是基础目的：准确定型，选择相容血液意义：输血安全、有效一、ABO和Rh血型鉴定1.ABO定型最适的反应温度为4℃，但在室温反应良好，常规的ABO定型试验仅在室温进行。红细胞常规ABO定性血型正定型反定

2、型抗A抗BAcBcOcA+--+-B-++--O--++-AB++---鉴定方法介绍1）玻片法、试管法(经典方法)玻片法和试管法的实验原理基本相同，二者的共同点是操作简便，玻片法只做正定型,试管法进行ABO血型鉴定的正定型和反定型。缺点：操作不易自动化、批量化、结果不易保存2）微柱凝胶法过滤介质为颗粒直径26-103nm的葡聚糖100凝胶，凝胶间缝隙只允许游离红细胞通过，与抗体反应的红细胞不能通过。工作程序和结果的判读易于标准化，自动化。该实验方法还具有所需标本少、结果准确、抗干扰能力强、溶血和脂血影响少、重复性好等优点，有利于实验室的质量控制，提高工作

3、效率。微柱凝胶法结果3）PCR血型基因分型包括PCR-SSP(PCR-序列特异性引物)技术、PCR-SSO(PCR-序列特异性寡核苷酶探针)技术、PCR-SSCP(PCR-单链构象多态性)技术、基因芯片等。基因分型技术的应用：①疑难血型鉴定：ABO血型亚型的鉴定、血型抗原减弱个体的血型鉴定、抗体消失的血型鉴定、获得性B的鉴定等②直接抗人球蛋白试验阳性的患者血型鉴定③亲子鉴定及法医应用等4)ABO血型的流式细胞术检测方法和原理是用荧光素标记人源抗-A、抗-B单克隆抗体，与待测标本中的红细胞反应,然后用流式细胞术检测待测标本中细胞与抗-A、抗-B单克隆抗体的

4、结合情况成本高、操作复杂,非常规方法利用流式细胞术对孕妇血流中微量的胎儿红细胞进行检测可以实现非侵入性胎儿血型鉴定抗原抗体比例：一般认为增加抗体量能提高检测敏感性，极少有显著性抗体过量而抑制凝集反应者（前带现象）。2滴血清+1滴2%～5%红细胞必要时血清增加到10～20滴前带现象：一种抗原-抗体反应的现象。以定量抗原检测抗体，若抗体过剩，可使所形成的免疫复合物反而减少，而不出现凝集。盐水试验多采用立即离心法,正确的操作是红细胞悬液加到血清后立即离心并观察结果。反应时间过长而延误立即离心的时间对ABO血型系统的抗体检出影响较大。①如果在室温放置2分钟后离心

5、,可能使凝集减弱,并伴有溶血现象。②如果在室温放置5分钟后离心,原有的凝集可能消失,并有溶血。常规定型试剂要求第一、高度特异，只能与相应的红细胞抗原发生凝集第二、抗A血清效价在1：128以上，抗B血清效价在1：64以上第三、亲和力要求抗体和抗原发生的速度应在两者相加后15秒内出现凝集，其强度为3分钟时凝块不小于1mm2第四，冷凝集素效价在1：4以下ABO定型试验中的常见问题1）技术和管理错误：标本、试剂、器材原因；离心力过度或不足；阳性反应产生溶血现象未能识别；漏加试剂、结果记录和判断错误；细胞与血清间比例不适当。2）血清异常：Wharton胶或血清蛋白

6、引起缗钱状形成，影响反定型结果。3）红细胞致敏：受免疫球蛋白致敏的红细胞，在含高蛋白介质的试剂中，可发生凝集。4）异常基因型：ABO亚型的检查中，A、B抗原可能为弱抗原，难以检出。5）近期输血：试验前输入ABO血型不一致的红细胞，使血液标本成为混合血型的红细胞悬液，定型时显示“混合外观凝集”现象。6）嵌合体血型（开米拉，chimerism）:这种血型者体内有两类红细胞群体，定型时可以出现“混合外观凝集”现象。7）疾病因素导致抗原减弱：某些白血病患者和难治性贫血患者等。8）红细胞多凝集现象：红细胞因遗传或获得性的表面异常，发生多凝集现象。9）获得性B：由于

7、革兰阴性杆菌的作用，红细胞可获得“类B”的活性。10）血型特异性物质过高：一些卵巢囊肿病例，血型物质的浓度很高，可中和抗A和抗B定型试剂，要得到正确的正定型结果，必须洗涤红细胞多次。11）近期内进行大量的血浆置换治疗：由于使用大量的非同型的血浆作置换治疗，造成反定型错误。12）异常的血浆蛋白：受检者血浆中异常的白蛋白、球蛋白比例和高浓度的纤维蛋白原等导致缗钱状形成，造成假凝集现象。13）不规则抗体的存在14）低丙种球蛋白血症:低丙种球蛋白血症（丙种球蛋白量减低）病例，可能会因免疫球蛋白水平下降而使血清定型时不凝集或弱凝集反应。15）药物等因素：药物、右旋

8、糖酐及静脉注射某些造影剂引起红细胞凝集或类似凝集。16）年龄因素：免疫系统尚未健