输血前相容性检测阎

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1、输血前相容性检测教学目的和要求掌握盐水法、抗人球蛋白法、聚凝胺法的原理、方法及意义。熟悉微柱凝胶法原理、方法。了解酶法、白蛋白介质法、Liss法的原理和方法。熟悉ABO/Rh血型鉴定方法及影响因素熟悉抗体筛选原理和意义熟悉交叉配血方法及意义了解抗体鉴定原理和意义血型鉴定抗体筛选及鉴定交叉配血红细胞抗原抗体检测技术红细胞抗原抗体检测技术应用微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术盐水介质凝集试验悬浮于盐水介质中的红细胞与相应抗体分子结合，交叉联结形成肉眼可见的凝集。主要检测IgM类抗

2、体（ABO系统、抗E）。抗A抗B特异性IgG类抗体有时可直接凝集悬浮于盐水中的红细胞，与红细胞表面抗原位点数目和抗原决定簇位置有关。盐水介质凝集试验方法：玻片法-便于显微镜观察结果试管法-适用于不同温度、便于洗涤反应温度：4～22℃临床意义：盐水凝集试验阳性，并在37℃也有活性的抗体有意义，这些抗体通常能用其他方法证明。室温有活性，37℃无活性者临床意义不大。试验记录4+（++++）：一个大凝集块，背景透明，无游离细胞3+（+++）：数个大凝集块，背景透明，无游离细胞2+（++）：许多小凝集块，背景稍混浊，有游离细胞1+

3、（+）：细小的凝集块，背景浑浊W+（±）：极细小凝集块，要用显微镜观察结果0（-）：无凝集，无溶血，细胞呈游离散在状态PH：部分溶血H：完全溶血Weakreactionsoftendifficulttointerpret.Canalsobedowngradedduetoshakingthecompletedtest.ConventionalTesting.盐水介质凝集试验◆结果分析：阳性-凝集或溶血阴性-无凝集或溶血先观察有无溶血、再观察有无凝集◆注意事项：细胞浓度2～5%（严格按说明书操作）、血清与细胞比例、反应温度、

4、弱凝集分析◆优点：简便、快捷、直观。◆缺点：不能发现不完全抗体。微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋白试验抗球蛋白试验是1945年由Coombs等人建立的，又称Coombs试验。抗球蛋白试验的建立在血型血清学上有着非常重要的意义。分为直接抗球蛋白试验（DAT）和间接抗球蛋白试验（IAT）。抗人球蛋白试验原理IgG类血型抗体（主要是免疫抗体，如Rh血型抗体）分子量小，与红细胞相应抗原结合后，在盐水介质中不出现肉眼可见的凝集反应，称之为不完全抗体，但在加入抗-IgG后，以其

5、搭桥作用则可出现凝集反应。补体成分在体内被红细胞抗原抗体复合物激活以后，结合在红细胞表面。在体外含补体的多克隆抗体，或抗C3b、抗C3d等单特异性抗体与补体致敏的红细胞反应，使之凝集也称为抗球蛋白试验。抗人球蛋白试剂多特异性抗球蛋白试剂：应含有抗IgG和抗-C3d。单特异性抗球蛋白试剂：抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、C4的片段。直接抗人球蛋白试验DAT是用来检测体内红细胞致敏情况，尤其是IgG和C3d包被的红细胞。用于：HDN和自身免疫溶血性贫血的诊断红细胞被药物抗体致敏的检查急性和迟发性溶血性输血反应的检查间接

6、抗人球蛋白试验用于测定在体外能引起红细胞致敏的抗体。用不完全抗体测定红细胞血型，如Rh血型。交叉配血。结果分析-假阳性●用免疫兔或羊制备的抗人球蛋白含有种间抗体。●红细胞在用盐水洗涤时已有凝集。●IAT试验中所用红细胞本身DAT阳性。●不抗凝标本在冷环境里经过一段时间的保存后，自身冷抗体发生作用，激活补体，补体成分结合在红细胞上，用多特异性抗球蛋白试剂会发生假阳性。●离心过度，红细胞压积过紧，不易充分摇散结果分析-假阴性致敏后的红细胞洗涤不充分,残留的球蛋白中和了试剂中的抗球蛋白，造成假阴性。操作过程不连续，时间过长，结

7、合在红细胞上的抗体解离。红细胞、血清和抗人球蛋白试剂保存不当都可能发生活性减弱或丧失。红细胞过多，反应减弱；红细胞过少，看结果不准确，都影响结果。试剂中抗人球蛋白浓度过大，有前带现象。孵育时间和温度不当，会使反应结果减弱或变为假阴性。观察结果时过度摇动试管，摇散细小凝块。注意事项每次试验要设有阴性和阳性对照。阴性结果要加入一滴IgG致敏红细胞实验器材清洁。注意抗原抗体比例、孵育时间、温度等条件。严格按照实验方法操作。排除自身抗体干扰。微柱凝胶免疫学技术聚凝胺试验酶介质凝集试验盐水介质凝集试验抗人球蛋白试验增强技术抗人球蛋

8、白试验微柱凝胶试验原理：微柱凝胶技术是用特定的化学物质做成微型凝胶柱，柱的上端有一个加样反应室。抗原抗体反应后离心，凝胶柱起过筛作用，红细胞凝集块不能通过凝胶的间隙而留在凝胶的上部，未凝集的红细胞通过凝胶的间隙，沉积到底部。微柱凝胶反应本质：凝集反应红细胞抗原与相应抗体反应出现凝集。根据红细胞在胶质介质中的位置肉眼判