HBD的N端融合蛋白的跨膜转导作用-论文.pdf

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1、华东理大学学报(自然科学版)Vo1．40NO．2176JournalofEastChinaUniversityofScienceandTechnology(NaturalScienceEdition)201404文章编号：1006-3080(2014)02—0176—06HBD的N端融合蛋白的跨膜转导作用杜璇，顾红艳，李亚丹，吴珍，赵健(1．华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室，上海200237；2．浙江日升昌药业有限公司，浙江东阳322100)摘要：研究人源性穿膜肽HBD的N端融合蛋白的跨膜转导作用。通过DNA重组技术将HBD融合在EGFP蛋白的氨基端(

2、N端)，构建重组质粒pET28b—HBD—EGFP—Histag，经IPTG诱导表达和Ni抖一NTA纯化，获得重组蛋白HBD—EGFP。通过激光共聚焦显微镜定性观察及流式细胞仪定量检测发现，融合在EGFP氨基端的HBD跨膜转导效率比融合在EGFP羧基端(C端)的HBD转导效率提高了约l0倍。实验结果表明，N端融合的HBDEGFP对于外源蛋白具有跨膜运输效果，且比C端融合的HBD具有更高的跨膜转导效率。该结果可为HBD在抗癌药物递送方面的有效应用提供理论依据。关键词：穿膜肽；肝素结合域；HeLa细胞；EGFP的N端中图分类号：Q71文献标志码：ATransmem

3、braneActivityofHeparin-BindingDomainFusedatN—TerminalofHeterologousProteinDUXuan，GUHong—yan，LIYa—dan，WUZhen。，ZHAOJian(1．StateKeyLaboratoryofBioreactorEngineering，EastChinaUniversityofScienceandTechnology，Shanghai200237，China；2．ZhejiangReachallPharmaceuticalCo．Ltd，Dongyang322100，Zhej

4、iang，China)Abstract：TostudythetransmembraneactivityofHeparin—BindingDomain(HBD)derivedfromhumanfusedatN—terminalofheterologousprotein，theexpressionplasmidpET28b—HBD—EGFP—HistagwasconstructedbygeneticallyfusingHBDtotheN—terminalofenhancedgreenfluorescentprotein(EGFP)．Thefusionprotein

5、HBD—EGFPwasexpressedinE．coliandpurifiedbyNi”一NTAaffinitychromatography．TheresultsshowthatgreenfluorescencecanbeobservedinHeIacellsusinglaserscanningconfocalmicroscopewhenHeLacellswereCO—culturedwithHBD-EGFP．Flow—cytometryresultsshowthatthetransmembraneefficiencyofHBDfusedattheN—term

6、inalofEGFPiSimprovedabout10timescomparedwiththeHBDfusedattheC—terminalofEGFP．TheseresultsdemonstratedthatHBDfusedtoN—terminalofheteologousproteinexhibitedtansmembraneactivity．TheHBDfusedattheN—terminalofEGFPhadahigherefficiencythantheHBDfusedattheC—terminaIofEGFP．Theseresultswillpro

7、videtheoreticalfoundationfortheefficientapplicationofHBDinthefieldofthedeliveryofanticancerdrugs．Keywords：cellpenetratingpeptides；HBD；HeLacell；N—terminusofEGFP收稿日期：2O13一O9—25基金项目：国家自然科学基金(81171449)作者简介：杜璇(1986一)，男，辽宁大连人，硕士生，研究方向为分子生物与生物药物。E—mail：1085228087@qq．corn通信联系人：赵健，E—mail：zha

8、ojian@ecust．edu．cn第