乙肝病毒核心蛋白钉突部位基因工程改造对其功能的影响-论文.pdf

《乙肝病毒核心蛋白钉突部位基因工程改造对其功能的影响-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、陈江燕等／乙肝病毒核心蛋白钉突部位基因工程改造对其功能的影响●四生物工程学报ChineseJournalofBiOtechnOIOgyNovember25，2013，29(11)：1663—1671http：／／journals．im．ac．cn／cjbcn~2013ChinJBiotech，Alrightsreserved乙肝病毒核心蛋白钉突部位基因工程改造对其功能的影响陈江燕，黄荣，陶颖，黄媛，罗英英，黄爱龙，胡接力重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室，重庆400016摘要：通过在乙肝病毒核心蛋白钉突部位插入标签蛋白EGFP及小片段多肽，研究各种改造对HBc功能

2、的影响。采用RLIC方法，构建野生型HBc、HBc钉突部位带不同接头的EGFP融合重组体、缩短的EGFP融合重组体，并构建与HBc功能r_~l-的质粒HBV1．1c一，将不同重组体与HBV1．1c一共转染HEK293细胞，通过观察荧光及Southernblotting检测病毒复制中间体，判断相应基因工程改造对重组蛋白中不同结构域功能的影响。RLIC方法可有效地用来进行片段缺失，且缺失片段大小及位置无明显限制。带柔性或刚性接头的重组HBc．EGFP均可产生绿色荧光，但荧光在细胞内分布形态不同，两种重组HBc—EGFP均不能支持正常的HBV复制，各种截短的插入片段以及aa79—80

3、单独缺失体亦不能支持HBV复制。结果表明RLIC方法是一种基因工程改造的有力工具，不同类型接头对重组蛋白的结构和功能有不同影响，aa79．80对维持HBc的主要功能之一——支持HBV复制有重要作用。关键词：乙型肝炎病毒，核心蛋白，绿色荧光蛋白，基因工程Received：February23，2013；Accepted：August20，2013Suppodedby：NationalNaturalScienceFoundationofChina(No．81000732)，NaturalScienceFoundationChongqing(Nocstc201ljjA10005)．C

4、orrespondingauthor：JieliHu．Tel：+8623—68486780；E—mail：hujielil977@163．corn国家自然科学基金(No．81000732)，重庆市自然科学基金(No．cstc201ljjA10005)资助。网络出版时间：2013-09—13网络出版地址：http：／／www．cnki，net／kcms／detail／11．1998．Q．20130913．0913．003．html1SSN1000—3061CN1l一1998／QChinJBioteehNovember25，2013Vo1．29No．11Impactsonhepat

5、itisBvirusreplicationbygeneengineeringatapicalloopreonoIPcapsi‘d1prot·ei‘nJiangyanChen，RongHuang，YingTao，YuanHuang，YingyingLuo，AilongHuang，andJieliHuKeyLaboratoryofMolecularBiologyonInfectiousDiseases，MinistryofEducation，ChongqingMedicalUniversity，Chongqing400016ChinaAbstract：HepatitisBvirus

6、(HBV)DNAreplicationtakesplaceintheviralcapsidthatconsistsof180or240copiesofHBVcapsid(HBcorcore)protein．Themonomericcoreproteincontainsanapicalloopregionthatformsthespikesonthesurfaceofviralcapsiduponcoredimerizationandcapsidassembly．ToinvestigatetheimpactonHBVDNAreplicationthroughgeneenginee

7、ringatthespikeOfHBVcapsid．plasmidsexpressingengineeredHBcwithlinker—fusedenhancedgreenfluorescentproteinrEGFP)orshortenedEGFPinsertionatthespikeregionwereconstructedbyRestrictionDigestionandLigation—independentCloning(RLIC)．ThewildtypeormutantHBcco