两种抗酸染色法查麻风杆菌的比较.pdf

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1、中国麻风皮肤痛杂志2012年12月第28卷第12期873·技术与方法·两种抗酸染色法查麻风杆菌的比较吴绍男麻风杆菌是挪威韩森于1873年首先从麻风病人净滤纸片盖于涂膜上，加3～4滴石碳酸复红液于滤的皮肤结节中发现的，故称韩森菌，按类属称麻风分纸上，再加3～4滴1g／L高锰酸钾溶液于滤纸上，混枝杆菌，简称麻风杆菌或麻风菌。按染色特性属抗酸匀浸湿滤纸，保持湿润染色60秒。去除滤纸，以清水杆菌。萋尼抗酸染色法是麻风杆菌细菌学检查的常缓缓冲去染液，滴加1％盐酸酒精，摇动玻片，使涂膜用方法。萋尼抗酸染色法效果很好，但是操作比较复脱至微带粉红色为止

2、，时间一般约30秒左右(对未达杂，同时存在以下缺点：①需要用酒精灯加热，时问要求者可反复脱色)，水洗后加0．6％碱性美兰液复染长，染料容易流到载玻片外，沾污实验台或地面，也难5～30秒，水洗自然干燥，镜检。染色及镜检的注意事以掌控；②加热时染液容易干，须不断添加染液，材料项要严格按《麻风检验质控手册》的要求和标准。以消耗大；③加热时产生石碳酸蒸气对人体有害。另上两种染色方法镜检报告参照生部颁布的《麻风杆外，基层麻风防治机构由于病例少，试剂放久容易沉菌密度及形态指数计录标准》。染片和镜检均采用双淀。为了寻找一种更为适合基层麻风防治机构易于

3、盲法，即随机选取涂片进行染色和镜检。报告方法：应用、控制实验条件和标准化操作的抗酸染色方法。用Ridley对数法计算细菌密度，每一级问相当于l0本人2008—2011年利用不加热快速抗酸染色法与萋倍之差。200个油镜视野未检出麻Ixl芮为阴件；平均尼抗酸染色法对l34份采自町疑麻风病人的组织液每100个视野有1～10条麻风菌为1+；平均每10个标本涂片染色，对比微镜检查麻风杆菌结果，现将视野有1～10条麻风菌为2+；平均每个视野有1～10结果报道如下条麻风菌为3+；平均每个视野有10～100条麻风菌l材料与方法为4+；平均每个视野有10

4、0～1000条麻风菌为5+；1．1样本来源可疑麻风病人的组织液标本134平均每个视野有1000条以麻风茼，并有大踺菌团份，采自2008—2011年住本院就诊的可疑麻风病人。为6+。密度指数是指各个涂膜细菌饼度(菌团所含涂膜的制备：载玻片的要求、涂片大小、厚薄的标准，菌数亦应包括在内)“+”数总和的平均值。每张染色严格按《麻风检验质控手册》的要求和标准。涂膜自的涂膜载玻片镜检结果按细菌平均密度指数分类，采然干燥后，在酒精灯火焰上固定(以不烫手为宜)。用四舍五入法取整数值归类。每次染色都没阴阳性1．2试剂萋尼法抗酸染液：按照1982年5月1

5、4日菌株质控对照，阳性对照用卡介菌涂片染色做质控，卫生部颁布的《麻风病皮肤查菌操作规程》的染色液阴性对照用大肠埃希菌ATCC25923涂片染色做质控。配制。1．4统计学方法采用SPSS18．0巾的配对样本t不加热快速抗酸染色法试剂：石碳酸碱性复红液检验。(配法同萋尼法)；1g／L高锰酸钾溶液；1％盐酸酒精；2结果0．6％碱性美兰溶液(配法同萋尼法)。134份可疑麻风病人的组织液标本两种染色镜检1．3操作方法对可疑麻风病人选用切刮法涂片，结果见表1。严格按《麻风检验质控手册》的要求和标准。每例可表1两种染色．方法镜检结果疑麻风病人采集到的

6、组织液作为1份标本。每例可方法一1+2+3+4+5+6+合计疑麻风病人查6个部位，分别为眶上、耳垂、下颌、腕不加热快速抗酸染色8817l18541134背、膝上及一处皮损部位。从每例可疑麻风病人每个萋尼法抗酸染色8817127631134部位采集到的组织液分别在两张载玻片上各涂1个配对样本t检验结果：t=1．745，P>0．05膜，1份标本制成了2张各有6个涂膜的涂膜载玻片。3讨论l张用萋尼法进行抗酸染色，具体操作按照1982年53．1麻风杆菌的形态、染色与结核杆菌相似，经萋尼月14H卫生部颁布的《麻风病皮肤查菌操作规程》。法抗酸染色后

7、在光学显微镜下能看到着色均匀的杆另1张用不加热快速抗酸染色法染色，不加热快速抗菌，细长、略带弯曲，也可看到对抗酸染色不均匀呈短酸染色法染色方法如下：放1片约2om×4cm的洁杆状、断裂状、串珠状及颗粒状等形态。萋尼法抗酸作者单位：广西北海市合浦县皮肤性病防治院，536100染色特点为对器械要求不高、实用，一直被基层医院874ChinJLeprSkinDis．Dec2012，Vo1．28，No．12使用。但由于基层麻风防治机构标本量少，而石碳酸本选择不同部分制造不同涂片以及菌落分布、计数误复红染液久置会产生沉淀，易造成染料沉淀于玻片差有关

8、。目前国内外虽普遍使用Ridley对数分级法，上，影响镜检效果，故需要经常过滤石碳酸复红染液。但不能认为它是十分完美的计数法。因5～7haiti直并且该方法的染色温度及时问不易掌握，在加温过程径约近千个油镜