qPCR—HRM法检测NSCLC组织EGFR突变.pdf

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1、NSCLC血清循环EGFR突变检测专栏《癌症进展》2012年1月第l0卷第1期0NCOLOGYPROGRESS，Jan2012，Vo1．10．Nol13qPCR—HRM法检测NSCLC组织EGFR突变郭惠琴#窦亚玲赵宇李晓光刘巍李泽坚中国医学科学院北京协和医学院北京协和医院检验科，胸外科，介入科，北京100730摘要：目的比较qPCR—HRM法和测序法检测非小细胞肺癌(NSCLC)组织表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的差异。方法收集北京协和医院胸外科2010年6月至2011年7月收治的42例非小细胞肺癌患者的石蜡标本，分别用q

2、PCR—HRM法和测序法检测肿瘤组织EGFR基因突变，使用McNemar检验比较其差别。结果42例标本qPCR—HRM法检测EGFR突变率为33．3％(14／42)，测序法为28．6％(13／42)，统计学计算未见差异(P=0．5)。结论qPCR—HRM法检测NSCLC组织EGFR基因突变是一种灵敏、可靠的检测方法，可用于体细胞EGFR突变的检测和测序前突变的筛选。关键词：肺癌高分辨率熔解曲线分析表皮生长因子受体中图分类号：R734．2文献标识码：ADetectEGFRmutationinNSCLCwithqPCR-HRMmeth

3、odGuoHuiqinDouyalingZhaoYuLiXiaoguangLiuWeiLiZejianDepartmentofDocimasiology，DepartmentofThoracicSurgery，DepartmentoflnterventionalMedicine，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollegeHospital，Beijing100730，ChinaAbstract：ObjectiveTocomparethedifferenceb

4、etweenqPCR—HRMmethodandsequencemethodindetectingEG—FRmutationinNSCLCtissue．MethodsEGFRmutationoftumortissuewasdetectedwithqPCR—HRMmethodandse—quencemethodinthe42paraffinembeddedsamplesselectedfromPUMCHthoracicdepartmentfromJune，2010toJuly，2011．ResultsEGFRmutationratew

5、as33．3％(14／42)and28．6％(13／42)withqPCR—HRMmethodandse—quencemethod，respectively．Thereisnosignificantdifferenceinthese2results(McNemarTest，P：0．5)．Conclu-sionqPCR—HRMmethodissensitiveandreliableinscreeningEGFRmutation．Keywords：Lungcancerhigh—resolutionmeltinganalysisepid

6、ermalgrowthfactorreceptorOneoJProg，2012，10(J)肺癌是我国当今肿瘤相关死亡率最高的恶性肿者中使用表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂瘤，其中约85％为非小细胞肺癌。以铂类为基础(EGFR—TKI)，较二联化疗方案可大大延长无疾病的二联化疗方案以往是进展期非小细胞肺癌的首选进展生存期或总生存期儿。因此EGFR基因状态治疗方法，但5年生存率不甚理想，仍<20％。的检测在NSCLC患者的治疗中有越来越重要的意靶向治疗的初步成功可以说是近十年NSCLC治疗义。目前临床上主要使用传统的直接测序法作为主领

7、域最鼓舞人心的发展。在EGFR突变的NSCLC患要的检测方法，但测序法过程繁琐、耗时长、灵敏通信作者(Correspondingauthor)，e—mail：guohuiqin2@163．COII1值绘制成熔解曲线，由于每一段DNA都有其独特4讨论的序列，其熔解曲线形状各异，如同DNA指纹图谱一样。根据曲线可以准确地区分野生型和突变型EGFR基因突变主要集中在酪氨酸激酶区基因。众多研究认为qPCR—HRM具有很高的灵(tyrosinekinasecodingdomain)的前四个外显子上，敏度、特异性、稳定性和重复性。主要的激活突

8、变包括19外显子delE746一A750和21我们的研究中，统计检验证明qPCR—HRM法和外显子L858R，以及18外显子、20外显子的突变。测序法(目前的“金标准”)检测结果未见差别。其中delE746一A750和L858R又叫经典突变或热点这