低氧肺动脉高压大鼠蛋白激酶CβⅡ蛋白表达及膜转位水平的变化.pdf

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1、Jun．2014．34(3)实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicinel81doi：10．3969／j．issn．1674-5817．2014．02．003低氧肺动脉高压大鼠蛋白激酶CIjlII蛋白表达及膜转位水平的变化郭万金1，施熠炜2，张爱珍1，杜永成(山西医科大学1．附属人民医院呼吸科，太原030001；2．第一医院呼吸科，太原030001)[摘要]目的建立慢性低氧性肺动脉高压大鼠模型并初步探讨蛋白基酶C~II(PKCI3II)在慢性低氧性肺动脉高压的发生发展过程中所起的作

2、用。方法建立慢性常压低氧肺动脉高压大鼠模型，将清洁级SD大鼠，随机分为正常对照组、低氧1d、3d、7d、14d和21d组，检测大鼠右心室收缩／&-(rightventriclesystolicpressure。RVSP)和右心室肥厚指数(rightventriclehypertrophyindex，RVHI)，采用HE染色观察肺动脉病理学改变，Westernblotting方法检测大鼠肺动脉内PKC~II蛋白表达和膜转位水平的变化。结果(1)与正常对照纽相比，低氧暴露1d3d7d、14d21d后RVSP均明显上升(P<0．05)；

3、RVHI低氧3d、7d、14d、21d组较正常对照组明显上升(P<0．O5)；低氧暴露3、7和21d组肺动脉病理学改变明显。(2)BⅡ蛋白的表达量在慢性低氧3d、7d、14d和21d与正常对照组相比明显降低(P<0．05)，慢性低氧3d后PKC[3II膜转位水平较正常对照组明显下降(0．05)。结论PKCISn-蛋白表达和膜转位水平的下调可能参与了大鼠慢性低氧性肺动脉高压的发生和发展过程。[关键词】蛋白激酶cBII；慢性低氧；肺动脉高压；膜转位；蛋白表达[中图分类号]R543．2Q95—33【文献标识码】A[文章编号]1674—5

4、817(2014)一03-0181—06低氧性肺动脉高压(hypoxicpulmonaryartery0)和非典型性PKC(aPKCt／X和<)，其中PKC~II为hypertension，HPH)是临床常见的病理生理过程，是经典型中的一个亚型⋯。已有研究证实PKC的多种慢性阻塞性肺疾病、问质性肺疾病等慢性缺氧性呼亚型介导了肺动脉平滑肌细胞的收缩、增殖、分吸系统疾病的主要并发症，主要表现为低氧性肺血化和凋亡等信号转导通路，参与了低氧性肺动脉高管收缩和肺血管重塑。肺动脉高压的发生可能与缺压的形成和发展过程[。鉴于目前PKC~II在常

5、压氧、神经体液、遗传等多种因素有关，但其发病慢性低氧性肺动脉高压整体动物模型中的研究较机制目前仍未阐明。蛋白激酶C(proteinkinaseC，少，本研究通过建立慢性低氧整体动物模型，观PKC)属于丝／苏氨酸蛋白激酶家族，迄今为止在哺察慢性低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉内PKC~III蛋乳动物中至少鉴定出1O种PKC亚型，根据其分子白的表达和膜转位水平的变化，初步探讨PKC~II结构和对激活剂的敏感性分为3个亚家族：经典型在慢性低氧性肺动脉高压的发生发展过程中所起的PKC(cPKCa，BI和BII)；新奇型PKC(nPKC8，E，和

6、作用。1材料与方法【收稿日期】2013．10．18【基金项目】山西省卫生厅科技攻关计划项目(No2011028)1．1主要试剂及仪器【作者简介】郭万金(1987．)，男，呼吸内科学硕士研究生，研究方兔源性多克隆抗体Anti-PKCI3II购自美国Santa向：肺血管疾病专业。E-mail：guowanjin2@126．comCruz公司、鼠源性单克隆抗体Anti-p—actin购自美【通讯作者】杜永成(1955一)，男，教授，博士生导师，从事肺血管疾病研究，E．mail：1806514968@qq．com国Sigma公司、辣根过氧

7、化物酶标记的山羊抗兔182实验动物与比较医学LaboratoryAnimalandComparativeMedicineIgG购自美国Chemicon公司，BCA蛋白定量试剂盒抑胃肽酶A5g／L，胰凝乳蛋白酶抑制剂5g／L，KF购自美国Pierce公司、Gel—Doc凝胶成像分析系统50mmol／L，冈田酸5X10～mmol／L，焦磷酸钠(美国Bio—Rad公司)、蛋白／核酸分析仪(美国Bamstead5mmol／L)，匀浆、破碎、离心，吸取上清，即公司)、高压氮氧混合气罐、氧浓度分析仪等。得到胞质蛋白成分。在移去上清的沉淀中，加

8、入1．2动物模型的建立和分组等体积的BufferB(BufferA+0．5％NonidetP一40)，匀清洁级6周龄雄性SD大鼠6O只，体质量2oo～浆、破碎、离心，吸取上清即得到膜相关蛋白成250g，由山西医科大学实验动物中心提供[SCXK分。胞