细胞培养-生命经纬－关注生命科学及医学研究.ppt

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1、细胞培养司徒镇强2003-4细胞培养的优点1.活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动2.可控制：可控制-选择对象：均一性、重复性哪一种：类型：上皮？间质？--性质：正常？肿瘤？--阶段：可控制-调节条件：各种因素物理、化学、生物等因素可控制-利用方法：采用各种研究技术、记录方法：研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记--记录：摄影照片、缩时电影、电视--优点3.应用广：学科多：对象广：

2、各种动物：低等动物--高等动物--人类一种动物：不同年龄--不同组织--正常或异常（肿瘤--）4.较经济：可提供大量、同时、重复性好的、生物学性状相似的实验对象细胞培养的缺点现人工模拟体内环境的技术已经很高,但,人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同.当细胞被置于体外培养后,生活在缺乏动态平衡的环境中,久了，必然发生变化.1.与体内主要不同相对孤立、相对单一缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相互间的影响2.主要表现失去原有组织结构和细胞形态分化减弱或不显细胞趋向单一化；

3、3.提示要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。生长类型体外细胞培养物的生长类型按生长方式:2型粘附型细胞:附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。悬浮型细胞:不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。绝大多数有机体细胞属粘附型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长贴附(粘附)型细胞粘附:是大多数有机体细胞在体内生存和生长发育的基本存在方式含义两方面结果基于粘附特性，使细胞与细胞之间相互结合形成组织，有机体的绝大多数细胞必须粘附于一

4、固相表面才能生存和生长。培养时：这些细胞被放到体外环境中以后,同样需要粘附于某一固相表面才能生存和生长，因而属于粘附型细胞。粘附(锚定或锚着)依赖型(性)细胞：唯有粘附于固相表面才能生存的细胞类型细胞在体内、外的粘附方式：存在差异体内：粘附是全方位外形具有复杂的立体特征体外：多数情况，细胞只有一个附着平面外形一般与体内时明显不同按照培养细胞的主要形态，可分为几大类型分类根据形态大致的不同，主要2类：上皮样成纤维细胞样其它，不定型上皮样细胞型名称：仅形态上似体内，实际上不完全等于--来源：来源

5、于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物消化道，乳腺，肺泡上皮性肿瘤形态：类似体内的上皮细胞扁平，不规则多角形，中有圆形核生长特点易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状生长时呈膜状移动很少脱离细胞群而单个活动成纤维细胞样细胞名称：凡在培养中形态与成纤维细胞类似的来源：由中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮形态：似体内成纤维细胞的形态胞体梭形或不规则三角形胞质向外伸出2—3个长短不等的突起中有卵圆形核生长特点排列成放射状，漩涡状并不紧靠连成片，细胞—细胞接

6、触易断开而单独行动游离的单独的成纤维样细胞，常有几个伸长的细胞突起贴附生长型--类型1.与体内同名的细胞不完全相同如：形态相似的成纤维细胞，可不同来源自同一动物不同组织的成纤维样细胞相似但发展趋向不同2.培养细胞的形态不稳定条件改变，细胞形态可有变化培养细胞形态不稳定血清Hela高血清低血清成纤维细胞样上皮样细胞pHHela太酸或太碱标准pH成纤维细胞样上皮样细胞细胞密度3T3低密度高密度成纤维细胞样上皮样细胞生长状态改变悬浮或贴附悬浮贴附圆形成纤维或上皮样转化与否未转化转化后成纤维样可成上

7、皮样悬浮生长型概念培养时不贴附于底物而呈悬浮状态生长或以机械方法使保持悬浮状态下生长来源自血，脾或骨髓，尤以血中白细胞癌肿细胞也可能特点在悬浮中生长良好细胞圆形，单个或小细胞团优点生存空间大，提供数量大传代方便(不需消化)易于收获可获得稳定状态缺点观察不方便很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞)