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《生命科学导论选修论文-鱼类细胞培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。
1、题目：鱼类细胞体外培养及其应用摘要：细胞培养作为细胞生物学乃至生物学研究的重要技术,在生物领域中越来越占有重要的地位。随着渔业的快速发展，鱼类细胞培养越发受到重视。因为其基于细胞培养技术的鱼类胚胎干细胞的研究对于基因打靶技术在鱼类发育生物学、鱼类基因工程育种及水产生物技术的应用具有重要意义。本文主要介绍其中设计的主要生物技术，及其实际应用之效果正文：鱼类细胞培养的概念和培养技术基本上和哺乳动物细胞培养相似。从高中生物课本上我们就知道，细胞培养可分为原代细胞培养和传代细胞培养两大类。原代细胞培养是指直接从动物的组织器官获得细胞所
2、作的首次培养,而传代细胞培养则体外生长的细胞进行扩大和继代。而细胞系或细胞株是已经命名的、经过细胞生物学鉴定的,形态比较一致,生长增殖比较稳定，生物学性状较清晰的细胞群。好了，明确了这些概念下面进入我们的正题：一、鱼类细胞原代培养组织来源鱼的很多组织器官可用于细胞培养。胚胎组织及幼鱼的组织器官,由于其分化程度低,分裂潜能大,是原代细胞培养的主要来源。幼鱼的性腺、肾、心、缥、脾、鳍条、吻端等也是常用的材料,尤以性腺和肾应用最广。下面介绍鱼类细胞组培的一些方法：（1）组织块固定法当组织量较少时可采用此法。它是将组织剪成约一立方毫米
3、的小块,按一定比例将组织块贴在瓶壁上,至少三十分钟以上,然后轻轻加人营养液置温箱培养。（2）机械分散法此法适用于细胞间连接较松散的组织,如胚胎组织及幼鱼全鱼。将组织剪成约一立方毫米耐的小块,放入底部有一铜网的注射器内,用手的压力将组织挤出网孔,最后将分散的组织吹打后加人营养液分装培养。（3）络合剂分散法目前使用的络合剂主要是乙二胺四乙酸,它能与细胞间钙离子、镁离子结合而使细胞连接松散,经吹打即可分散。该法目前主要用于囊胚细胞培养及上皮型细胞系的传代。（4）酶消化法该法是目前采用极为广泛的方法,适用于绝大多数组织器官。所用的酶主
4、要是胰酶,常用浓度是百分之零点二五。根据酶消化时温度的不同,又可进一步分为冷消化法及热消化法。（5）冷消化法此法是将组织剪成约刀的小块,然后置一倍体积的胰酶中,四摄氏度越夜。二、鱼类传代细胞培养原代细胞经一培养长成单层后就要进行传代扩大。将营养液弃去,用百分之零点零五浓度的胰酶、百分之零点零二的EDTA混合消化液洗涤后,再加入适量该液消化,所用温度与细胞培养温度相同,一般为二十摄氏度。当大多数细胞变圆后,加人营养液吹打,最后分瓶培养。三、培养中的注意事项细胞培养对如温度、二氧化碳浓度、值和一定的营养条件等有着严格要求。首先，细
5、胞培养要求无菌操作。无菌是细胞培养成功的首要条件,其常规要求一般的操作者都可以做到。但某些细节问题应特别引起重视进人无菌室操作前必须将培养瓶外表消毒提防试剂瓶中的液体浸湿瓶盖,这往往是试验污染的重要因素之一。且严禁操作时手在各种器皿上方经过,并尽量保持皿口水平或倾斜,可大大降低污染阎。作为动物细胞培基重要添加成分的动物血清,由于其蛋白含量高,组成复杂,批次间质量差异大,价格昂贵且有可能携带有害微生物。因此,尽可能使用同一批号血清。另外,使用前血清应在℃水浴中保持,以杀灭支原体。四、鱼类细胞培养及其应用鱼类细胞培养已广泛应用于鱼
6、类遗传学、病毒学、药物学及生物技术等多方面。包括以下几个方面鱼类细胞培养特别是原代细胞培养应用于鱼类染色体数目及形态的研究,对活体取样,所采用的细胞包括血细胞主要是淋巴细胞、鳍上皮细胞及鳞片上皮细胞,采取这些细胞时对活鱼损害极小。利用ES细胞进行基因操作异源基因导人通过显微注射、逆转录病毒介导或电脉冲介导,将外源导人,使原有基因超表达增加功能或使原有基因表达减弱降低功能或使原有基因关闭失去功能基因重组基因打靶,即通过同源重组,按预期方式改变遗传信息的方法。构建两种同源靶载体序列置换和序列同源进行定位整合,通过直接或间接克隆筛选
7、法、正负选择法和多聚酶链反应法等方法,将定位整合的细胞选择出来诱导基因突变用于转基因动物。鱼类病毒学是鱼类细胞培养最主要的应用领域。美国水产学会曾次推出的鱼类病毒病检测标准已成为国际水产界所公认的标准。在此标准中细胞培养检测鱼类病毒病峭占有非常重要的地位。用不同方法对鱼类传染性造血器官坏死病病毒进行检测和比较,认为细胞培养检测鱼类病毒病原具有不可取代的地位。细胞培养在鱼病学中的应用主要包括以下几个方面：病毒的分离鉴定将可疑病料接种敏感细胞。作为病毒的分离培养已是鱼类病毒病的常规手段,病毒分离后再作鉴定,常用中和试验和荧光抗体技
8、术病毒的大量增殖细胞培养技术可在体外大量扩增病毒,进而用于病毒分子生物学研究包括病毒分肤及基因分析、制备抗血清包括常规抗体及单克隆抗体和疫苗包括弱毒苗和灭活苗等流行病学研究包括病毒不同血清型及天然弱毒株的分离、比较等。目前，鱼细胞培养也已广泛应用于药物测试中。且其具有以下优点
