一种半变性琼脂糖凝胶电泳技术的改良_钟正伟

《一种半变性琼脂糖凝胶电泳技术的改良_钟正伟》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、第40卷第12期广州化工Vol．40No．122012年6月GuangzhouChemicalIndustryJune．2012*一种半变性琼脂糖凝胶电泳技术的改良钟正伟(承德石油高等专科学校化学工程系，河北承德067000)摘要:建立一种经济快捷的利用半变性琼脂糖凝胶电泳技术分析酵母朊病毒迁移特性的方法，在蛋白样品制备过程中采用珠磨破碎法代替文献使用的昂贵的藤黄节杆菌酶酶解法破碎酵母细胞，使用TBE代替文献使用的TAE作为电泳缓冲液，并使用电湿+转法代替文献使用的毛细虹吸法转印蛋白。对酵母朊病毒［PSI］的朊蛋白迁移特性分析结果显示，改良法不影响文献法的准确性，但降低了实验

2、成本，缩短了实验时间。关键词:半变性琼脂糖凝胶电泳;酵母朊病毒;迁移;改良中图分类号:Q936文献标识码:A文章编号:1001－9677(2012)12－0077－03AnImprovedSemi－DenaturingDetergentAgarose*GelElectrophoresisTechniqueZHONGZheng－wei(DepartmentofChemicalEngineering，ChengdePetroleumCollege，HebeiChengde067000，China)Abstract:Aneconomicandfastmethodforassayin

3、gthemobilitypropertiesofyeastprionbySemi－DenaturingDe-tergentAgaroseGelElectrophoresis(SDD－AGE)wasestablishedbasedonthepreviousreports．TheexpensiveZy-molyaseenzymatichydrolysismethod，whichwasusedtobreakingyeastcellsintheprocessofproteinsamplepreparationwasreplacedwithbeadmillmethod．TAEelect

4、rophoresisbufferandthecapillaryblottingfortransferofproteinsdescribedintheliteraturewerereplacedbyTBEbufferandawetelectroblotting，respectively．Themobilitypropertiesoffusionpro-+－teinGFP－Sup35pinyeastprion［PSI］and［psi］cellsweredetectedbyourimprovedSDD－AGEtechnique．Theresultsshowedthattheimpr

5、ovedmethodnotonlymaintainedtheaccuracyoftheliteraturemethod，butalsoreducedex-perimentalcostsandtime．Keywords:SDD－AGE;yeastprion;mobility;improvement目前的研究表明酵母朊病毒不仅在淀粉状纤维的结构和形并借助疏松网状结构的琼脂糖凝胶支持大分子蛋白的分离，蛋成机制上与动物朊病毒类似，而且酵母朊病毒细胞形成淀粉状白显影后可以清晰地观察酵母朊病毒聚集体的迁移特性从而可纤维的生物化学环境和分子伴侣体系也和动物细胞极为相分析酵母朊病毒聚集体的大

6、小。在他们报道的SDD－AGE操作［1－4］似。因此酵母朊病毒为研究哺乳动物朊病毒形成的分子机流程中一般采用藤黄节杆菌酶酶解酵母细胞壁后制备蛋白样制及研发抗朊病毒疾病药物提供了一个良好模型。在酵母朊病品，采用TAE作为电泳缓冲液进行水平半变性琼脂糖凝胶电泳，［9－10］毒形成的分子机制及利用酵母朊病毒模型筛选抗朊病毒药物的并采用毛细虹吸法转印蛋白后进行标准的蛋白显影操作。研究中，获得酵母朊病毒聚集状态或朊病毒聚集体大小的相关+本文以表达融合蛋白GFP－Sup35p的酵母朊病毒［PSI］为研［5－6］信息是最重要的问题之一。早期研究酵母朊病毒聚集状态究对象，对文献的SDD－AG

7、E操作方法进行改良，采用珠磨破碎在蛋白水平采用的方法是SDS－PAGE结合免疫印迹技术，该技仪破碎酵母细胞壁后制备蛋白样品，使用TBE代替TAE作为电术可以准确区分酵母朊病毒的聚集或可溶状态，但由于大量的泳缓冲液，并使用电湿转法转印蛋白后进行蛋白显影操作。实SDS将朊病毒聚集体完全裂解为SDS不溶的朊病毒单体的技术验结果显示，改良法不影响文献SDD－AGE技术的准确性，但降［5－6］缺陷因而无法定量分析朊病毒聚集体的大小，而朊病毒聚低了实验成本，缩短了实验时间。［7］集体的分子大小是影响朊病毒传播的重要