61食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验

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1、中华人民共和国国家标准GB4789.10—2010食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验NationalfoodsafetystandardFoodmicrobiologicalexamination:Staphylococcusaureus2010-03-26发布2010-06-01实施中华人民共和国卫生部发布GB4789.10—2010前言本标准代替GB/T4789.10-2008《食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》和GB/T4789.37-2008《食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌计数》。本标准与GB/T4789.10-200

2、8和GB/T4789.37-2008相比，主要修改如下：——修改了标准的中英文名称；——修改了范围；——规范了样品制备过程；——增加了计算公式中系数1.1的解释；——修改了附录A中胰酪胨大豆肉汤的名称，规范为10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤；——增加了第二法金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数和第三法金黄色葡萄球菌MPN计数。本标准的附录A、附录B、附录C是规范性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：——GB4789.10-84、GB4789.10-1994、GB/T4789.10-2003、GB/T4789.10-2008。——GB/T47

3、89.37-2008。IGB4789.10—2010食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验1范围本标准规定了食品中金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）的检验方法。本标准第一法适用于食品中金黄色葡萄球菌的定性检验；第二法适用于金黄色葡萄球菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数；第三法适用于金黄色葡萄球菌含量较低而杂菌含量较高的食品中金黄色葡萄球菌的计数。2设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：2.1恒温培养箱：36℃±1℃。2.2冰箱：2℃～5℃。2.3恒温水浴箱：37℃～65℃。2.4天平：

4、感量0.1g。2.5均质器。2.6振荡器。2.7无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。2.8无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。2.9无菌培养皿：直径90mm。2.10注射器：0.5mL。2.11pH计或pH比色管或精密pH试纸。3培养基和试剂3.110%氯化钠胰酪胨大豆肉汤：见附录A中A.1。3.27.5%氯化钠肉汤：见附录A中A.2。3.3血琼脂平板：见附录A中A.3。3.4Baird-Parker琼脂平板：见附录A中A.4。1GB4789.10—20103.5脑心浸出液肉汤(BHI)：见附录A

5、中A.5。3.6兔血浆：见附录A中A.6。3.7稀释液：磷酸盐缓冲液：见附录A中A.7。3.8营养琼脂小斜面：见附录A中A.8。3.9革兰氏染色液：见附录A中A.9。3.10无菌生理盐水：见附录A中A.10。2GB4789.10—2010第一法金黄色葡萄球菌定性检验4检验程序金黄色葡萄球菌定性检验程序见图1。检样25g(mL)样品+225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤，均质36±1℃℃18h～24hBaird-Parker平板,血平板36±1℃℃血平板18h～24hBaird-Parker平板18h～24h或45h～48hBHI肉汤

6、和营养琼脂小斜面涂片染色观察溶血36±1℃℃18h～24h血浆凝固酶试验报告图1金黄色葡萄球菌检验程序5操作步骤5.1样品的处理称取25g样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000r/min～10000r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min。若样品为液态，吸取25mL样品至盛有225mL7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。5

7、.2增菌和分离培养3GB4789.10—20105.2.1将上述样品匀液于36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。5.2.2将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird-Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。5.2.3金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上，菌落直径为2mm～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触

8、菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻