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1、第55卷第5期化工学报Vol155№52004年5月JournalofChemicalIndustryandEngineering(China)May2004研究论文重组人γ2干扰素包涵体稀释复性靳挺关怡新费峥峥姚善泾(浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027)摘要采用稀释法研究了重组人γ2干扰素包涵体复性条件,如温度、pH值、蛋白浓度、复性液中脲浓度,同时对加样操作方式进行了考察,得到了较为适宜的复性条件.结果表明,脲能有效地抑制复性过程中蛋白质的-1聚集,合适的脲浓度随复性蛋白浓度的增加而有所增大,在4℃
2、、pH值810、脲浓度110mol·L、蛋白浓度-15-1011mg·ml及脉冲加样操作方式等条件下,复性后重组人γ2干扰素的活性为2139×10IU·ml,比活达21217-1×10IU·mg.关键词重组人γ2干扰素包涵体稀释复性中图分类号Q511文献标识码A文章编号0438-1157(2004)05-0770-05RENATURATIONOFRECOMBINANTHUMANINTERFERON2γINCLUSIONBODYBYDILUTIONJINTing,GUANYixin,FEIZhengzhengandYAOS
3、hanjing(DepartmentofChemicalandBiochemicalEngineering,ZhejiangUniversity,Hangzhou310027,Zhejiang,China)AbstractTheexperimentalconditions,includingtemperature,pH,denaturedproteinconcentrationandureaconcentration,intherenaturationprocessofrecombinanthumaninterferon
4、2γinclusionbodybydilutionwerestudiedandatthesametimepulserenaturationwastested1Theoptimumrenaturationconditionswereobtained1Resultsshowedthatureacouldsuppresstheaggregationofproteinduringtherenaturationprocessandthesuitableureaconcentrationincreasedwiththeincreas
5、eofdenaturedproteinconcentration1Theactivityand5-17-1specificbioactivitywasupto2139×10IU·mland2121×10IU·mgrespectivelyunder4℃,pH810,-1-1110mol·Lurea,011mg·mlproteinandpulserenaturationoperationmode.Keywordsrecombinanthumaninterferon2γ,inclusionbody,renaturationby
6、dilution扰素生产成本高、产量低,难以大规模应用于临引言[2]床.1982年美国Genetech公司的Gray等完成了人γ2干扰素(IFN2γ)具有重要的生物学活人γ2干扰素基因的克隆和在E1coli细胞内的表性,主要表现为抗病毒、抗肿瘤(抑制细胞增殖)达,为人γ2干扰素的大规模制备创造了条件.与其[1]和对免疫系统的调节作用等,由于天然人γ2干他E1coli细胞表达生产的重组蛋白一样,人γ2干2003-02-13收到初稿,2003-07-15收到修改稿.Receiveddate:2003-02-13.联系人:姚善
7、泾.第一作者:靳挺,男,31岁,博士研究生.Correspondingauthor:Prof.YAOShanjing.E-mail:yaosj@基金项目:国家自然科学基金(No120076042)及浙江省自然che1zju1edu1cn科学基金(No1201099)资助项目.Foundationitem:supportedbytheNationalNaturalScienceFoun2dationofChina(No120076042)andtheNaturalScienceFoundationofZhejiangPro
8、vince(No1201099).第55卷第5期靳挺等:重组人γ2干扰素包涵体稀释复性·771·扰素在E1coli中的表达也会形成不溶的、无活性11212包涵体的洗涤将人γ2干扰素包涵体粗品-1的包涵体,因此将其转变成有活性的蛋白,即蛋白加入到50mmol·LTris2HCl(pH值810)配制的质复性,是大规模制备
