western blot之page胶电泳和转膜

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8、转染您所在的位置：首页>新技术专栏WesternBlot之PAGE胶电泳和转膜[选购宝典]【字体：大中小】www.ebiotrade.com时间：2005年09月13日来源：生物通摘要：在转移膜上显色其实就像是画家在画布上作画一样，不光要有好的画笔和颜料，适合的画

9、布也是相当之重要。WesternBlotting亦是如此，没有选择好合适的转移膜是无法做出漂亮的结果的。因此，选择适合的转移膜，要让转移“膜”高一尺，帮衬而不是阻碍到我们的实验。免费索取：仅需3398元，AmershamECL预制胶电泳礼包拿回家！分享到：•别出心裁特别好用的蛋白分子量标准•谁可小看“蛋白标准”（下）•谁可小看“蛋白标准”（中）•谁可小看“蛋白标准”（上）•WesternBlot仪器之选href="http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-8/2005825181619.htm"target=_blank>Wes

10、ternBlot仪器之选•WesternBlotting前传：想成为高手吗？•WesternBlot为什么必须要用内参？生物通WesternBlot技术专辑之PAGE胶电泳和转膜http://www.ebiotrade.com/newsf/2005-9/2005913154358.htm2013-1-24WesternBlot之PAGE胶电泳和转膜[选购宝典]-PAGE胶电泳

11、Western-生物通Page2of7   PAGE倒胶的仪器我们在前面WesternBlot仪器之选已经介绍过了，除了顺手的工具能防止漏胶，PAGE剂和配方比例对电泳结果的质量当然有

12、决定性的影响，这个配胶的比例，在《分子克隆》上有详细的论述家都不难查到。容易忽视的问题主要在于过硫酸铵（AP）一定要新鲜——最好用小指管配AP（写日期）保度，超过2周的AP扔掉算了，或者已经反复打开使用多次的AP都别用，小气病发作的后果往往是得不偿失不好多半是这里疏忽（或者混合不匀），因为相对配胶的其他组分，AP算最活跃分子——如果还有诸如漏或者配比错误或者Buffer搞错，那绝对是你自己找骂，不值得同情。水要用去离子的纯水，MilliQ级更好Cambrex(原来的FMC)有商品化的丙烯酰胺母液，很贵，也很好——配出的胶对200KD以上的蛋白的分辨率PAGE

13、胶，条带清晰漂亮，可惜一直没有搞清楚配方的奥秘；但是数十倍于丙烯酰胺粉剂的价格令人却步，接触丙烯酰胺粉尘严重过敏的人可以选择这个。更加豪华的选择是已经凝好的预制胶，各种配方各种比例大小多少任君选择，打开即用，当然更直接方便，更吸引人的是结果漂亮，分辨率高，特别是重复性好，是"razorsharp"啊！平时都能用这么豪华的东西心情当然超爽啊，实验紧凑又轻松，效率也更高啊！如能这么“好马配好鞍”，想必更容易出结果，也就更容易拿经费吧！什么时候我们的实验才能实现这种良啊！Invitrogen旗下的Norvex和Cambrex（原来的FMC）PAGEr都是首选预制胶

14、。可是在“社会主义初级阶奢侈品平时流流口水就算了，偏偏最近Invitrogen公司推出了新的优惠活动，买3盒NuPAGE预制胶就送电电转移，面对这种诱惑，你难道就没有一点非份之想的冲动？上样电泳：上样前蛋白样品最好离心，上样量不宜过多，以免看结果时，每个条带都弯弯地“笑”你贪多哦。其他的操作，按照说明控制电流，不要过多重复使用电泳Buffer（别小气，重复使用会降低缓冲能力像基本不会出问题了。当预染的Marker告诉你，你要分辨的蛋白已经到达最佳分辨区——分离胶的2/3处泳结束了。电泳结果检查：如果要做WesternBlot，是否需要先检查电泳结果呢？能先看

15、看结果如何再进行下一步转好。考马斯亮蓝使用简便快速，可以分辨1ug左右的条带，是最经济通用的蛋白PAGE胶电泳染色方法。银杂一些但分辨率高很多，可以分辨2-5ng蛋白。可是由于考马斯亮蓝染色或者银染经过固定不可逆结合，面的WesternBlot实验，很多人会选择省略掉这一步——同样的样品跑2块胶，一块染色一块转膜，一般明问题。如果想在转膜前看看电泳结果，你需要用SYPROTangerine——这种金色荧光蛋白染料灵敏度很测4ng-8ng蛋白，接近银染，但使用非常简单，最重要的是由于不用酸碱或者有机溶剂固定，不干扰蛋白别适合Western转膜前的染色，或者非变

16、性胶的活性蛋白的检测（比如染色后还需要在胶上进行活性