细胞生物学-实验一 显微镜.pdf

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1、实验课要求•提前10分钟到实验室，换好实验服，放好书包；•上课期间认真听讲、亲手操作实验，不打闹喧哗；•注意保持实验室环境卫生，安排值日生；•按照要求认真书写实验报告，按时上交；•安排好小组组长和班级负责人，负责课上纪律维持、报告收发和信息发布；•平时成绩核定：上课表现50%；实验报告50%细胞生物学与细胞工程实验的总体安排（10-18周）•实验一显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验•实验二动物细胞培养液的配制与灭菌•实验三动物细胞的组织块培养法•实验四动物组织的消化及细胞冻存•实验五细胞复苏及活力测定•实验六细胞骨架的光镜

2、观察•实验七小鼠骨髓细胞染色体玻片标本的制作•实验八细胞融合（与实验四合并）•实验九血涂片的制备及细胞大小的测量实验一显微镜的技术参数及特殊光镜的演示实验验证型实验一、实验目的•理解并掌握光学显微镜的成像原理；•掌握光学显微镜正确的使用方法；•理解显微镜的重要技术参数；•了解普通光镜及各种特殊光镜的构造及应用；二、实验原理光学显微镜的构成及成像原理（见实验内容）三、实验器材•仪器：普通光学显微镜、暗视野显微镜、相差显微镜、荧光显微镜、倒置显微镜•材料：草履虫培养液、鸭跖草5四、实验内容1、光学显微镜：是利用光学原理把人眼所不

3、能分辨的微小物体放大成像,以供人们提取微细结构信息的光学仪器。2、大体发展历程：发明：16世纪末，荷兰眼镜商詹森父子（Z.Jansen）•1665年，英国科学家罗伯特·胡克（R.Hooke）•大约1680年，荷兰博物学家安东尼·冯·列文虎克（AnthonyVonLeeuwenhoek，1632-1723)•1752年，英国人J.Dollond发明消色差显微镜。•1812年，苏格兰人D.Brewster发明油浸物镜，改进了体视显微镜。•1886年，德国人ErnstAbbe发明复消色差显微镜，并改进了油浸物镜，至此普通光学显微镜

4、技术基本成熟。Bausch&LombInvestigatormicroscope–circa1893•1932年，荷兰籍德国人F.Zernike成功设计了相差显微镜（phasecontrastmicroscope)，并因此获1953年诺贝尔物理奖。•1932年，德国人M.Knoll和E.A.F.Ruska发明电镜，1940年，美、德制造出分辨力为0.2nm的商品电镜。TEM•1981年，瑞士人G.Binnig和H.Rohrer在IBM苏黎世实验中心（ZurichResearchCenter）发明了扫描隧道显微镜。Csatom

5、s(red)ontheGaAssurface(blue).•ErnstRuska，GerdBinnig和HeinrichRohrer分别因为发明电子显微镜和扫描隧道显微镜而分享1986年的诺贝尔物理学奖。显微镜的分类明视野显微镜按照明技术分暗视野显微镜荧光显微镜相差显微镜可见光显微镜按像的形成分干涉相差显微镜偏光显微镜光学显微镜显倒置显微镜微按镜体结构分实体显微镜镜比较显微镜紫外光显微镜不可见光显微镜红外光显微镜X射线显微镜透射电子显微镜电子显微镜扫描电子显微镜非光学显微镜3、种类：普通光镜、荧光显微镜、暗视野显微镜、相差显

6、微镜、倒置显微镜等。4、光学显微镜成像原理165、普通光学显微镜的结构及作用1）光学系统：光源部件、聚光器、物镜、目镜等；2）机械系统：（从下往上）（1）镜座（2）载物台（3）镜臂（4）调焦螺旋（5）物镜转换器（6）镜筒物镜数值孔径6、光学显微镜的技术参数：1）分辨力Resolution：指在25cm的明视距离处能区分开被检物体上两个相近质点间的最小距离。R=0.61λ/N．A．–其中λ为入射光线波长；–N．A．为镜口率（或称为数值孔径）,N．A．＝ｎsinθ，n=介质折射率；2θ=镜口角（样品对物镜镜口的张角）。•思考：如

7、何提高显微镜的分辨能力？21通常2θ最大值可达140°，θ角最大为70，Sin70°=0.94；λ最小0.45μm（蓝色光），由公式可知当λ和Sin值均不变时，介质折射率n越大，能区分的二点之间的距离就越短，物镜的分辩率越好。n=1（空气中），分辨率R=0.29μm；n=1.52（油镜下）R＝0.19μm，油镜下分辨率更好。R=0.2μm光镜的分辨极限介质空气水香柏油α溴萘折射率11.331.5151.6622几种介质的折射率232）放大率(magnification)•最终成像的大小与原物体大小的比值。•M=Mob×Moc

8、=△/f1×250/f2•物镜的放大率是对一定的镜筒长度而言的，镜筒长度的变化不仅导致放大率的变化，而且成像质量也受到影响。•适宜的总放大率是所用物镜数值孔径的500－1000倍，在此范围内称为有效放大倍数。243）清晰度：显微镜形成轮廓明显物像的能力。影响物像清晰度的主要因素是物镜。要提