炼油厂含酚废水生物降解中优势菌的驯化筛选.pdf

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1、炼油厂含酚废水生物降解中优势菌的驯化筛选沈齐英，等炼油厂含酚废水生物降解中优势菌的驯化筛选沈齐英1，刘录1，申林波2，沈秋英3（1.北京石油化工学院，北京102600；2.北京燕山石化集团公司炼油事业部，北京102503；3.抚顺石油学院，抚顺113001）摘要：为了得到降解酚类化合物的优势菌株，以燕化炼油厂的活性污泥作为菌源，苯酚作为底物，在好氧条件下，驯化、筛选出4种菌株，生物降解实验结果表明：这4种微生物对酚具有较强的降解能力。关键词：酚；优势菌；生物降解中图分类号：X703文献标识码：A

2、文章编号：1003-650（42001）增-0001-03酚类属芳香族化合物，具有较强毒性且较难降解。生物处于内源代谢阶段。菌种的驯化和筛选分2组，酚若进入生物体内，会引起蛋白质变性和凝固。含酚其中第一组采用一次性加入大剂量化合物的驯化方废水在我国水污染控制中被列为重点解决的有害废水法，第二组采用定时逐渐加量的驯化方法。之一［1］。取污泥1g接入含酚2000mg/L50mL的唯一碳源无机盐液体培养基中，大剂量冲击驯化，编号为1，另1实验材料和方法取污泥1g接入含酚500mg/L50mL的唯一碳源

3、无机盐［2］液体培养基中，以500mg/L、1000mg/L、1500mg/L、1.1实验材料菌源：北京燕山石化集团公司炼油事业部污水厂2000mg/L逐渐加量驯化，编号为2，上摇床振荡床培的活性污泥。养，转速为120r/min，温度为2511C，培养241后，将唯一碳源无机盐培养基：KH2PO4，0.5g/L，培养液放置，等泥沙沉降后，培养液呈浑浊态；取编号K2HPO4，0.5g/L，MgSO4·7H2O，0.2g/L，CaCI2，0.1g/L，1的培养液3mL接入含酚浓度为2000mg/L5

4、0mL的新NaCI，0.2g/L，MnSO4·H2O，微量，FGCI2，10%，1滴；鲜培养液中，取编号2的培养液3mL接入含酚浓度为NH4NO3，1.0g/L；苯酚，500mg/L，1000mg/L，1500mg/L，1000mg/L50mL的新鲜培养液中，重复上述培养过程，2000mg/L。直到编号2含酚的浓度为2000mg/L。共驯化961。富集培养基：牛肉浸膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，分别以无菌操作琼脂平板划线分离，每个样瓶划琼脂18g，水1L，pH7.4~7.6。两个平板，置27

5、C电热恒温箱中培养481后，挑取单一琼脂平板（分离培养基）：牛肉浸膏5g/L，蛋白胨菌落接种于牛肉膏斜面上，同一条件继续培养481后，10g/L，氯化钠5g/L，琼脂20g/L，分别配制苯酚500mg/4C冰箱保存。L，硫化钠100mg/L，苯酚500mg/L+硫化钠100mI/L各1.2.2菌种的观察与鉴别500mI。观察并记录微生物的生长状况、个体形态特征、菌斜面培养基（保存培养基）：蛋白胨5g/L，酵母膏落特征，对菌株进行革兰氏染色。5g/L，葡萄糖1g/L，琼脂20g/L，K2HPO41

6、g/L，pH=7。1.2.3生物降解实验以上所有溶液采用蒸馏水配制并高压灭菌。菌种的活化富集培养：以无菌操作将选好的菌株主要仪器：DH3600A电热恒温培养箱，YX-280B接种于50mL活化富集培养基中，27C、120r/min好氧蒸汽消毒器，HZO-C空气浴振荡器（摇床），XSP-18B显振荡培养241后，制备0.5g/mL（0.5g湿菌体悬于1mL微镜，752光电分光光度计等。无菌去离子水中）菌悬液备用。1.2实验方法以无菌操作分别取浓度0.5g/mL菌悬液5mL，接［3~4］1.2.1优

7、势微生物的驯化和筛选种于含酚500mg/L、1000mg/L、1500mg/L和2000mg/L将新鲜的活性污泥在空气中曝气241，使其中微的唯一碳源培养基各50mL内，2511C、120r/min振荡培养，测定31、61、91后各培养瓶内酚含量。基金项目：本项目由北京燕山石化集团公司炼油事业部资助1.2.4酚含量的测定作者简介：沈齐英（1963-），女，硕士，讲师，从事生物工程的教学科研工用4-氨基安替比林直接吸光光度法测定各培养作。瓶内酚的含量［5］。·1·第24卷增刊200l年l2月l.2

8、.5炼油厂实际污水生物降解实验挑起、生长良好，菌落直径在5mm左右。将选好的菌株浓度为0.5g/mL的菌悬液5mL，接（3）GH-3菌种：G+、短棒状、排列成串；菌落乳白种于燕山石化公司炼油厂污水50mL内，251lC、色、不规则凸起、表面较干燥、生长良好，菌落直径在l20r/min振荡培养，测定01、31、61、91后培养瓶内酚2mm左右。含量。在测定酚含量前，试样进行蒸馏处理。（4）GH-4菌种：G-、棒状、排列不规则；菌落桔黄色、较大、形状不规则、个别为椭圆形、比较光滑、有光2结果泽、生长