广西莱姆病的初步调查研究

《广西莱姆病的初步调查研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、中国人兽共患病学报ChineseJournalOfzooose1225DOI：10．3969／cjz．j．issn．1002—2694．2013．12．021广西莱姆病的初步调查研究II{i、李永学，刘敏，王树声。，廖国厚。，曾霞，^、、中图分类号：R377文献标识码：B文章编号：1002—2694(2013)12—1225—04莱姆病是一种人兽共患病，因该病1975年首先酶购自捷瑞生物工程(上海)有限公司。Biospin细发现于美国康涅狄格州的莱姆地区而被命名为莱姆菌基因组DNA提取试剂盒、Biospin胶回收试剂盒病。莱姆病的病原体已证实为伯氏

2、疏螺旋体，其有购自杭州博日科技有限公司。PGEM—TVeetor多种动物宿主，主要通过硬蜱叮咬传播。莱姆病患System购自Promega公司。大肠杆菌XL1一blue由者若不及时治疗，可导致患者心脏、神经系统、关节广西医科大学微生物学教研室保存。等多系统、多器官的损害，严重者可终身致残，甚至1．4莱姆病螺旋体的分离死亡L1]。莱姆病的分布很广泛，除南北极以外，各大1．4．1鼠类鼠经编号和鉴定鼠种后，将其腹部向洲均有流行，并且发病区域和发病率呈扩大和上升上固定，用碘酒和75酒精消毒体表。用经过高压的趋势。我国于1986年由艾承绪等首次在黑龙江灭菌的

3、剪刀先在鼠剑突皮下剪一个口，再沿两边腹省海林县发现莱姆病病例以来，血清流行病学调查外线剪至腹股沟外侧，将整个腹部皮肤向下翻。器表明至少29个省(直辖市、自治区)的人群存在伯氏械烧灼灭菌后，剪开腹部肌肉，暴露腹腔，取绿豆大疏螺旋体感染，并从19个省(直辖市、自治区)的患小的膀胱组织，接种于BSK—II培养基中33℃恒温者、蜱和鼠等的样本中分离到伯氏疏螺旋体]。本培养。每周取样于暗视野显微镜下观察，如1个月课题组于2000年开始先后在广西乐业县的雅长林后仍未见莱姆病螺旋体生长则盲传一代，2个月后场和花坪镇林区、都安县、天峨县、南丹县林区、南宁仍未见螺旋

4、体生长才可判为阴性。市上尧码头和贵州省荔波县瑶山乡拉片村(与广西1．4．2蜱类将蜱用灭菌PBS液洗去杂质，75相邻)开展分离培养莱姆病螺旋体、莱姆病病原体宿酒精浸泡30min，再用灭菌PBS液洗3次，置无菌主和传播媒介的调查以及分离株基因型鉴定的工滤纸上吸干，剪去头部，在消毒载玻片上压出内脏，作，并取得了一些初步结果，现将结果总结后报告如力少许BSK一1I培养基后，用眼科摄摄碎内脏，置于BSK—II培养基中33℃恒温培养和观察。1．5菌株鉴定ll_1材料与方法一_l一1．5．1_PCR扩增5s-23srRNA基因间隔区序列1．1调查地点广西乐业县的

5、雅长林场和花坪镇用细菌基因组DNA提取试剂盒提取菌株DNA后林区、都安县、天峨县、南丹县林区、南宁市上尧码头进行PCR扩增。、PCR扩增引物序列为：上游引物：和贵州省荔波县瑶山乡拉片村。5一GCGGGAGAGTAGGTTATT一3，下游引物：5,r—1．2标本来源采用布笼法捕鼠，现场分类鉴定。CTAGGCATTCACCATAGACT-3。反应条件为：于水牛、黄牛、山羊和捕获的鼠身上采集寄生蜱，将94℃预变性5min，94℃变性45S，52℃退火45S，采集到的蜱放人装有无菌滤纸条的试管中并分类72℃延伸lmin此过程共33个循环，72℃延伸1O编号

6、。／，．，}．1』min。．，1．3主要试剂和菌株BSK—II培养基由中国疾病1．5．2重组质粒的构建和转化PCR产物用Bi9一控制中心传染病预防控制所提供。TaqDNA聚合spirt胶回收试剂盒纯化回收后与载体PGEM~T连接，4———————=__·、℃过夜，将重组质粒转化到大肠杆菌XLl-blue中、通讯作者：曾霞,Email：Ziia-gx(~=aliyun．tom1．5．3序列测定和分析}挑选出阳性克隆并测序，作者单位：1．浙江省医学科学院病毒病研究所，浙江普康生物技术股份有限公司，杭州、310053；将序列结果与GenBank中各基因型

7、的莱姆病螺旋2．广西中药大学附属瑞康区院，南宁530011；体相关序列比较，分析其同源性，从而确定分离株基3．广西疾病预防控制中心，南宁530028；4．广西医科大学，南宁530021因型。1226中国人兽共患病学报2结果离出10株螺旋体，其中8株分离自广西境内的南宁2．1标本采集结果共捕获鼠117只，其中褐家鼠市上尧码头、乐业县雅长林场和花坪镇林区(分别命18只，黄毛鼠12只，黄胸鼠36只，小林姬鼠10只，名为GXSH7、GXLD4、GXLD8、GXLD9、GXLD16、小家鼠6只，斯氏家鼠1O只，锡金小鼠13只，黑家GxLD18、GXLD20、

8、GXLR8)，其余2株分离自与广鼠7只，板齿鼠4只，社鼠1只。共采集到蜱319西相邻的贵州省荔波县瑶山乡拉片村(分别命名为