药敏纸片的制备.doc

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1、药敏纸片的制备及药敏试验方法抗菌药物对预防或治疗动物疾病发挥了巨大的作用，但随着抗菌药物在兽医临床的广泛使用，尤其为了防治疾病，常常以亚剂量水平的药物添加于饲料中，以致长期使用后病原微生物产生了耐药性，使本来对治疗病原微生物感染有效的抗菌药物失去作用，给兽医临床上有效地预防和治疗疾病的发生带来一定的困难。通过制作自家药敏纸片进行试验,可快速进行药物的筛选,获得对病原微生物敏感的药物,对指导临床合理用药，提高治疗效果，节约养殖过程的用药费用，有着重要的意义。一.药敏纸片的制备1.材料抗菌药物、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、冰醋酸、新华1

2、号定性滤纸、50mL容量瓶、无菌过滤器或一次性过滤器等2．方法2.1PBS的配制A.制备0.2mol/L储备液0.2mol/LNa2HPO4：35.61gNa2HPO4.2H2O+1000mL蒸馏水或71.62gNa2HPO4.12H2O+1000mL蒸馏水0.2mol/LNaH2PO4:31.2gNaH2PO4.2H2O+1000mL蒸馏水或27.6gNaH2PO4.H2O+1000mL蒸馏水B.将两种储备液按下表比例，配制成不同pH值的PBS,室温保存备用0.2mol/L磷酸缓冲液的配制pH值0.2mol/LNa2HPO4(

3、mL)0.2mol/LNaH2PO4(mL)5.88.092.06.012.387.76.218.581.56.426.573.56.637.562.56.849.051.07.061.039.017.272.028.07.481.019.07.687.013.07.891.58.58.094.55.52.2抗菌药物原液的配制和保存期限2.2.1抗菌药物配制溶剂和保存期限抗菌药物溶剂浓度（g/mL）－20℃4℃青霉素pH6.0PBS12803个月1周半合成青霉素类pH6.0PBS12803个月1周头孢菌素类pH7.8PBS12

4、803个月1周氨基糖苷类pH7.8PBS12803个月4周四环素类pH4.5PBS12803个月1周多粘菌素B硫酸盐pH6.0PBS12803个月2周林可或氯林可霉素pH7.8PBS12803个月2周红霉素先用少量乙醇溶解，再用12803个月2周pH7.8PBS氯霉素先用少量乙醇溶解，再用1280长期长期pH6.0PBS利福平先用甲醇溶解，再用pH6.012803个月1周PBS万古霉素蒸馏水12803个月2周两性霉素B蒸馏水12803个月1周5－氟胞嘧啶先用少量二甲基甲酰胺溶12803个月2周解，再用蒸馏水甲氧苄氨嘧啶先用0.1

5、mol/L乳酸溶解再1280长期长期用蒸馏水稀释各种磺胺药先用NaoH溶解再用蒸馏水2560长期长期稀释22.2.2配制方法A.按抗菌药物原液中药物百分含量的要求，计算出纯抗菌药物的重量，方法是：抗菌药物终浓度×终体积。例：要配制１２８０g/mL的庆大霉素５０毫升，所需要的纯抗菌药物质量为１２８０×５０＝６４０００gB.根据纯抗菌药物的重量和抗菌药物原粉的百分比计算出所需抗菌药物原粉的重量，方法是：纯抗菌药物的质量÷抗菌药物原粉的百分含量。如:某庆大霉素原粉的含水量为4.19％，则需要庆大霉素原粉的质量为64000÷（1－4

6、.19％）＝6.68×104g=66.8mg=0.0668gC.各种抗菌药物按上述表进行溶解后定容。D.无菌条件下过滤，4℃保存备用。2.3药敏纸片的制备2.3.1空白纸片的制备用打孔机将制作直径为6毫米左右的圆形滤纸，按50张一份，将制作好的滤纸分装到小西林瓶里，用牛皮纸封瓶口进行高压（121℃，15min）,烘干备用。2.3.2抗菌药纸片的制备不同细菌对不同抗菌药纸片的药物含量要求标准菌种抗微生物药纸片含药量（g）肠杆菌科氨苄西林10美洛西林75哌拉西林100替卡西林75头孢唑啉30头孢噻吩30庆大霉素10阿米卡星30卡

7、那霉素30奈替米星30链霉素10四环素30多西环素303米诺环素30环丙沙星或左氧氟沙星5吉米沙星5诺氟沙星10氧氟沙星5西诺沙星100奈啶酸30磺胺药250或300甲氧苄啶5A.根据不同药物药敏纸片的药物含量要求，计算出50片药敏纸片需要的药物总含量，方法是：５０×每张药敏纸片的含药量。如：制备一份（５０片）含药量为１０g的庆大霉素，所需的抗菌药物总质量为５０×１０＝5００gB.药物总含量除以抗菌药物原液的浓度，得出50片药敏纸片需要的抗菌药物原液的总体积，抗菌药物总质量÷抗菌药物原液浓度。如：制备一份庆大霉素药敏纸片所需

8、的抗菌药物原液的体积是5００÷１２８０＝０．390625mＬ即390.625ＬC.在无菌条件下，将各抗菌原液加入装有纸片的小西林瓶中，用纸密封瓶口。D.置西林瓶37℃烘箱，将含药物的纸片烘干。E.在无菌条件下，取一片烘干后的药敏纸片加入到灭菌的肉汤中，检查是否