【毕业设计-医学论文】关于瘦素及其受体在椎间盘组织的表达及意义.doc

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1、关于瘦素及其受体在椎间盘组织的表达及意义【摘要】目的探讨瘦索及其受体在椎间盘组织表达及意义。方法采用免疫组织化学技术检测正常椎间盘（21个）与退变椎间盘（39个）组织屮瘦索及其受体的表达，用免疫细胞化学技术检测体外培养的纤维环细胞屮瘦索及其受体的表达。结果退变椎问盘组织屮瘦索及其受体的表达高于正常椎间盘组织，差异有显著性（"3.223、5.553,P【关键词】瘦索;椎间盘;免疫组织化学[ABSTRACT]ObjectiveTostudytheexpressionsandtheirsignificanceofleptinandleptinreceptorinintervertebraldisc.

2、MethodsExpressionsofleptinanditsreceptorproteinweredetectedin21normalintervertcbraldiscsand39degenegativediscs,andinhumancellsofarmularfibrosusculturedinvitro,immunohistochemicallyandimmunocytochemically,respectively.ResultsTheexpressionsofleptinanditsreceptorindegenerativediscswerestrongerthanthato

3、fthenormaldiscs（t=3.223,5.553;P[KEYWORDS]leptin;intervertcbraldisc;immunohistochcmistry瘦索是肥胖基因编码的肽类激索，体内许多组织屮有瘦索及其受体的表达。瘦索具有很多重要的生理作用，包括调节食欲、控制体质量、调节机体炎性反应和免疫功能及促细胞增殖等[1]。瘦索在肥胖的发生过程屮扮演重要的角色。同时，研究证明肥胖也是椎问盘蜕变的重要危险因索。椎间盘退变与骨性关节炎发病过稈极为相似，其机制除了传统的生物力学因索外，目前研究较多的生物化学因索可能也起着比较重要的作用。现已证明关节软骨细胞可以表达瘦索及其受体，并且瘦

4、索可以刺激软骨细胞的体外增殖，通过促进骨赘形成参与骨性关节炎的发病过稈[2],而瘦索在椎间盘退变过稈屮的作用报道很少。木实验旨在探讨瘦索系统在椎间盘屮的表达及其在椎间盘退变发生发展屮的作用。1材料与方法1.1标本及其来源腰椎间盘标木60个，L3,4椎间盘6个，L4,5椎问盘31个，L5S1樵间盘23个。均来白于青岛大学医学院附属医院2008年4月-2009年1刀因腰椎间盘突出症、腰椎外伤爆裂骨折经手术治疗的病人。所有病人均知情同意。病人中男27例,女24例;年龄21〜59岁,平均41岁。所有病人术前均未行过硬膜外封闭、化学溶核及经皮穿刺髓核切吸术。所取标木包括纤维环和髓核。正常组21个，纳入标

5、准为：①术前MRI显示所取的椎间盘组织T2加权像上Pfirrmarm分级I〜III级;②术前无神经根刺激症状。退变组39个，纳入标准为：①术前MRI显示所取的椎间盘组织T2加权像Pfirrmann分级IV〜V级;②术前存在明显神经根刺激症状。齐标木取出后置于40g/L甲醛溶液屮固定，Carnoy液4°C过夜，不同梯度的乙醉脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。4〜5Um厚连续切片，以备苏木精伊红染色和免疫组化检测用。1.2方法1.2.1切片光镜观察用苏木精伊红常规染色。1.2.2免疫组织化学染色瘦索兔抗人多克隆抗体和瘦索受体羊抗人多克隆抗体购HSantaCruze公司；ImmunostainSPKit试

6、剂盒和DAB显色试剂盒购自福州边新生物技术开发公司。载玻片均经多聚赖氨酸浸泡24h防脱片处理，60°C烤箱烘烤干燥。切片常规讲行脱蜡、阻断内源性过氧化酶的活性、抗原修复和封闭，采用SP法进行免疫组织化学染色，DAB显色。实验中采用PBS代替一抗作为阴性对照，以脂肪组织的染色结果作为阳性对照。结果判定：瘦索及其受体表达阳性物质位于细胞内，阳性结果为棕黄色。每张切片随机选取纤维环区域10个高倍镜视野，计数每个视野的阳性细胞数，再将10个高倍镜视野细胞数相加，得出每个样木阳性纤维坏细胞数。1.2.3纤维环细胞培养椎间盘标本取自25岁男性腰椎间盘突出症病人，在离体30min内取冋实验室。仔细分离出纤维

7、环组织，把纤维环纽•织剪成lmm大小的碎块，用胰蛋白酶及胶原酶消化后，细胞用IIAMF12培养液冲洗3次，低速离心5min,计数板进行细胞计数。将细胞接种于培养瓶内，置于培养箱屮进行培养。细胞爬片行苏木精伊红染色，见细胞为梭形或多角形，胞核卵圜形，胞浆淡染。然麻进行瘦素检测：40g/L多聚甲醛固定10min;PBS冲洗3次,每次3〜5min;2g/LTritonX100透化,室温5min;PBS冲