口蹄痘诊断技术——液相阻断ELISA试验在操作中的注意事项-论文.pdf

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1、疫病防制口蹄痘诊断技术液相阻断ELISA试验在操作中的注意事项冯妹玲(广阳区动物疫病预防控制中心河北廊坊065000)液相阻断ELISA实验最大的优点是使用灭活型板)转移至ELISA板上，避免将ELISA板转移到抗原，因而无需担忧散毒，也摆脱了对细胞培养和U型板上，注意移板的目的是将U型板中的抗原抗实验动物的依赖，用以检测动物接种疫苗后血清中体复合物转移到包被了FMD型特异性抗体的抗体的分泌水平，具有快速、灵敏、准确等优点，此ELISA板中，继续进行免疫反应及酶促反应。将移液方法克服了病毒中和试验无法在临床检测中推广器从稀释倍数高的孑L开始转移，必须及

2、时更换枪头的缺点，适合于大批样品的血清学调查，是国际认(即移一孔更换一次枪头)。可的一种标准化诊断技术。但是此实验过程比较繁4温育：在实际操作中，总习惯将微量板放入温琐、时间比较长，操作过程中一个环节稍有不慎就箱即开始计时，没有考虑微量板孑L内温度从室温升有可能导致实验数据不准、试验失败。根据近几年到37尚需一定时问(大约10min)，这样容易造成的实验室实际操作的过程现将操作细节及注意事实际测定中温育时间不够，因此温育时间最好是项总结如下：70min。1试剂的回温及室温孵育：试剂盒中的试剂，包5若病毒抗原放置时间长，则会影响OD值，使括包被用的反应板

3、，在使用前应恢复至室温，特别OD值偏低。有可能造成假阳性，病毒抗原最好不要是冬季气温较低，应充分的回温。室温孵育时，避免超过半年。在冷气、光照、通风口等温度不均匀的位置操作；加6底物：底物溶液配好后应为无色，否则就不能样后反应板必须用封板膜封严，否则会造成水分过使用；需配制较长时间使用，用10mL离心管分装避多蒸发，影响试验结果；反应板尽量均匀放置于孵光于一20℃保存，根据测定ELISA板数量取用(一育箱，不可重叠放置，以免传热不均匀。板大约用5mL)，用前避光溶化，临用时必须加双氧2不同批次的试剂盒成分不能混用：同一试剂水，如忘记加双氧水，反应溶液不

4、能显色，会导致试盒中的每种成分都被优化和作为一个整体进行工验失败。注意：加底物后就不能再甩了1作，为了使试验结果准确，避免使用不同批次的试7终止液：终止液的加入顺序应尽量与底物液剂成分。的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底3样品稀释、加样及转移：物反应时间到后应尽快加入终止液。(1)样品稀释：应先加稀释液，然后加待检8结果判定：酶标仪读数前应先预热半小时，酶血清。标仪读数时应注意微孔板底部洁净，定期清洗酶标(2)加样：应将液体加在孔底，避免加在孔壁上仪滤光片。部，轻轻晃动均匀，不要出现气泡，否则一些弱阳性总之，在实际操作中必须认真做好每一个环的

5、样品容易出现假阴性；避免样本溅出：fL~'l-。节，否则就会出现阴、阳性及病毒液对照孔不成立，(3)移板：一定将抗原抗体混合液从反应板(u导致实验失败。■GY36中国动物保健2073年(第15卷)第12期