体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立-论文.pdf

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1、中西医结合心脑血管病杂志2014年1月第12卷第1期·83·体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立D马培泽，宋宪波，刘宁，姜月华，戴国华摘要：目的建立大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)缺氧模型。方法植块法培养CMECs，免疫细胞化学鉴定微血管内皮细胞特异性标志。将原代培养的CMECs在1O一94N一5c0z低氧气体环境中培养24h制备低氧损伤模型(I组)，以无血清常氧培养作为对照组(N组)。倒置相差显微镜观察缺氧前后细胞形态变化，MTT法测定细胞活力，AnnexinV—FITC和PI双标记法测定细胞凋亡率。结果植块法培养的大鼠CMECs具备典型微血管内皮细胞特征；Ⅷ因子、cD31相

2、关抗原免疫染色鉴定均阳性。缺氧前后细胞形态无明显变化；与N组比较，L组细胞活力明显增加(P<0．05)；细胞凋亡率明显降低(P<0．05)，其中早期凋亡降低最明显(P<0．01)。结论本方法可以成功建立简便、易行的CMECs细胞缺氧模型。关键词：心肌微血管内皮细胞；缺氧模型；细胞活力；细胞凋亡中图分类号：R329．2R285．5文献标识码：Adoi：10．3969／j．issrL1672—1349．2014．O1．046文章编号：1672—1349(2014)01—0083—03EstablishmentofHypoxicModelofCulturingCardiacMicrovascul

3、arEndothelialCellsinVitroMaPeize，SongXianbo，LiuNing，etalTheFirstClinicalCollege，ShandongUniversityofTraditiona1ChineseMedicine(Jinan250011)Abstract：0bjectiveToestablishahypoxicmodelofculturingcardiacmicrovascularendothelialcells(CMECs)invitro．MethodsTheCMECswereculturedbythemethodofplantingmyocard

4、iumtissue．Itsspecificantigenwereobservedbyimmunocytochemistry．TheoriginalgenerationofcultivatingCMECsin1O2—94N2and94CO224hhypoxicgasenvironmenttodeveloptheprepa—rationoflowoxygendamagemodel(I)，withnormalserumfreeoxygentrainingasthecontrolgroup(N)．Invertedphasecontrastmi—croscopeobservationofcellmo

5、rphologicalchangesbeforeandafterhypoxia，MTTdeterminatecellvitality，AnnexinV—FITCandPIdoublemarkingmethodtodeterminecellapoptosisrate．ResultsCulturedratCMECshasthetypicalcharacteristicsofmicrovascularendothelialcells．Ⅷfactor，CD31relatedantigenimmunestainingwerepositiveidentification．Noobviouschange

6、inmorphologybeforeandaftercellsanoxic．ComparedtotheNgroup，cellvitalityinLgroupwasobviouslyincreased(P

7、acmicrovascularendothelialcells；hypoxiamodel；cellvitality；cellapoptosis缺血性心脏病已成为威胁人类生命健康的主要杀手，而心1．4实验方法肌微血管内皮细胞(cMECs)功能障碍一直是缺血性心脏病病1．4．1大鼠CMECs培养和鉴定组织植块法j。选用雄性因、发病机制及其防治研究领域中的热点l1]。在体CMECs的SD大鼠，1O水合氯醛0．3mI／lOOg腹