人类胞内氯离子通道蛋白3在原核细胞及真核细胞内的表达-论文.pdf

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1、·1202·安徽医科大学学报ActaUniversitatisMedicinalisAnhui2014Sep；49(9)人类胞内氯离子通道蛋白3在原核细胞及真核细胞内的表达李春雨，潘林鑫，刘晓颖，范礼斌摘要目的研究人类胞内氯离子通道蛋白3(CLIC3)在真关键词CLIC3；细胞定位；蛋白表达核细胞中的定位和表达，及其GST融合蛋白在原核细胞中中图分类号R341；R394．2的表达。方法以含人CLIC3的全长cDNA序列的质粒为文献标志码A文章编号1000—1492(2014)09—1202—04模板，PCR扩增CLIC3片段，构建真

2、核表达载体pcDNA3．1一CLIC3一FLAG，检测其定位及表达；构建原核表达载体pGEX一胞内氯离子通道(chlorideintracellularchan—5X一3CLIC3，转化到大肠杆菌BL21菌株，IPTG诱导融合蛋nels，CLIC)蛋白家族是一个相对较新的离子通道蛋白GST—CLIC3表达。结果细胞免疫荧光结果表明CLIC3白类家族，其在主要结构上(三级结构的跨膜区)不在COS7细胞质和细胞核中均有分布；Westernblot结果显示同于其他通道_1]。在脊椎动物中目前已知CLIC蛋CLIC3在HEK-293T细胞中

3、能有效表达；考马斯亮蓝染色结白家族有6个成员，分别是CLIC1—6，并且CLIC蛋果表明融合蛋白GST—CLIC3在BL21菌株中能有效表达。结白具有高度保守性J，在无脊椎动物中有3个成员。论人类的CLIC3蛋白COS7、HEK-293T及大肠杆菌BI21菌株均能有效表达，为进一步了解CLIC3的功能奠定了一定CLIC家族成员和谷胱甘肽s转移酶(glutathioneS—的基础。transferase，GST)超家族成员共同分享结构同源-3]。CLIC蛋白区别于其他离子通道蛋白的一2014—05—05接收个独特特点是它们拥有以两种不

4、同形式存在的能基金项目：安徽省教育厅自然科学重点科研项目(编号：力：一种是可溶球状形式，另一种是完整的膜蛋KJ2010A187)；国家自然科学基金青年基金(编号：白。81201368)；安徽省自然科学基金(编号：人类CLIC3基因定位于9q34．3，由236个氨基11040606M170、11040606M164)；安徽医科大学博士基金(编号：XJ201009)酸组成，其编码蛋白大小为26．6ku。CLIC3分布于作者单位：安徽医科大学生命科学学院生物学系，合肥230032多种组织，如胎盘、肺、心脏、肾、胰腺，少量存在于骨作者简介：

5、李春雨，女，硕士研究生；骼肌中J。目前研究已经证实了CLIC3的可溶刘晓颖，女，副教授，责任作者，E—mail：xyz2848@sohu．性结构，但大量的生化分析和细胞定位研究还尚无corn；范礼斌，男，教授，硕士生导师，责任作者，E．mail：lfan@定论。该研究通过构建CLIC3的真核表达载体，通ahmt1．edu．(31"1过质粒转染、免疫荧光、免疫印记等方法研究外源性Researchonundetectionofnon．EV71andnon．CoxA16relatedHFMDpathogensidentifiedbyusi

6、ngVP4geneMuChaoyu，ZhuangXiaoliang，ZhaoJun，etal(DeptofMicrobiology，AnhuiMedicalUniversity，Hefei230032)AbstractObjectiveToinvestigatetheaccuracyofPCRfordetectionofnon．EV71andnon．CoxA16byusingU．niversalprimerswithVP4geneofHEV．MethodsWhenidentifiedbyVP4geneofEV71andCoxAI6u

7、nrelatedHFMD，twoisolatesofSabin一1werefound(suchasFy-O1andFy-02)．TheywereidentifiedbyCO．primerssuchasEVP4／Q8andspecificprimersofVP1gene．ResultsFy-O1isolateswereappearedwithanunusualfraymentandidentifiedasCoxAlOafterbeingsequencedandtheselectedindependentclonesweresequen

8、cedandblastedinGenBank．ItprovedthatbothSabin一1andCoxA10existed．ConclusionClinicaldiagnosisofEV71andCoxA16unrelatedHFM