牛布鲁氏菌BP26间接ELISA检测方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第3期中国预防兽医学报VO1．36．No．32014年3月ChineseJournalofPreventiveVeterinaryMedicineMar．2014doi：10．3969~．issn．1008—0589．2014．03．13牛布鲁氏茵BP26间接ELISA检测方法的建立左玉柱，王增利，路广计，王振来，郑丽丽(1．河北农业大学动物科技学院，河北保定071001；2．河北省动物卫生监督所，河北石家庄050081；3．河北省动物疫病预防控制中心，河北保定071000)摘要：为建立检测牛布鲁氏菌(Bmcella)@-清抗体的间接ELISA

2、方法，本研究将原核表达并纯化的Bmcella外膜蛋白BP26作为包被抗原，采用方阵法确定包被抗原和待检血清的最佳工作浓度，经过对各种反应条件进行优化，建立了牛Brucella间接ELISA抗体检测方法。该方法对其他相关的牛病病原无交叉反应，其组内和组间的变异系数均小于10％，具有良好的重复性。对100份临床血清样品进行检测，同时将建立的间接ELISA方法与IDEXX公司的同类试剂盒进行比较，符合率为93％。本研究为布鲁氏菌病提供了一种简便的血清学诊断方法。关键词：牛布鲁氏茵；BP26蛋白；间接ELISA中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：

3、1008—0589(2014)03．0223．04DevelopmentofindirectELISAforBrucellaabortuscoatingwithBP26ZUOYu-zhu，WANGZeng—li，LUGuang~i，WANGZhen-lai。，ZHENGLi-li(1．CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，AgriculturalUniversityofHebei，Baoding071001，China；2．AnimalHealthAuthorityofHebei，Shijiazhuan

4、g050081，China；3．HebeiCentreforAnimalDiseasesControl&Prevention，Baoding071000，China)Abstract：TodeveloprapidmethodfordetectingantibodiesagainstBmcellaabortus，anindirectenzyme-linkedimmunosorbentassay(iELISA)wasestablishedusingthepurifiedrecombinantproteinBP26expressedinE．coliascoa

5、tingantigen．Undertheoptinalconditionsincludingworkingconcentrationsofcoatingantigenandserumsamples．TheresultsshowedthattheassaywasspecifictodetecttheantibodyagainstB．abortusinbovineserumandnocross—reactionwithpositiveantiserumOmotherrelatedbovinediseases．Furthermore，comparingwit

6、hthecommercialELISAkitformIDEXXcompany，thespecificitywas92％，sensitivitywas94％andcoincidenceratewas93％．TheestablishediELISAmethodprovidedasimpleandrapidserologicaldiagnostic．Keywords：Bovinebrucella；BP26protein；indirectELISA布鲁氏菌病(Brucellosis)是由布鲁氏菌(Brucella)行趋势不断上升[2]，一旦发病很难治愈，所以急

7、需引起人畜共患的一种传染病，呈慢性经过，临诊主一种快速诊断该病的方法。该病的诊断主要分为细要表现流产、睾丸炎、腱鞘炎和关节炎，严重威胁菌学和血清学检测方法。细菌学检测方法较可靠，着人畜健康[1]。近年布鲁氏菌病在世界范围内的流但所需时间较长，危险性大，不便推广】。血清学*Correspondingauthor收稿日期：2013—03—05基金项目：河北省科技支撑计划项目(10220301D)作者简介：左玉柱(1976一)，男，山东菏泽人，副教授，主要从事动物传染病学研究通信作者：E．mail：wangzlh891220@163．com224中国预防兽医

8、学报2014正检测方法主要包括试管凝集试验、虎红平板凝集试和P／N值，以确定最佳的包被条件。验