基于16S rRNA基因的不同血清型鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法的建立-论文.pdf

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1、第36卷第1期中国预防兽医学报VO1．36．No．12014年1月ChineseJoumalofPreventiveVeterinaryMedicineJan．2014doi：10．3969~．issn．1008-0589．2014．01．13基于16SrRNA基因的不同血清型鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法的建立谭秋杉1,2，高利荣，王晓杜，蒋昭君，沈蔷，张先福f1．浙江农林大学亚热带森林培育国家重点实验室培育基地，浙江临安311300；2．浙江农林大学动物科技学院，浙江临安311300)摘要：为建立一种快速诊断鸭疫里默氏杆菌(RA)病的方法，本研究根据NCBI登录的ATCC

2、11845菌株fCP003388．1)的16SrRNA基因保守序列设计引物，对标准株和疑似感染RA的病料样品进行检测，建立RAPCR检测方法。结~E．-,P-，6株RA标准株(包括1、2、10和11血清型)和2个疑似RA感染的病料样品，均能够扩增出698bD的特异性片段，而鸭大肠杆菌和鸭沙门氏茵扩增均呈阴性。测序分析表明，疑似病料样品中扩增的片段与ATCC11845菌株相应片段同源性达99．9％。PCR敏感性试验检测显示，其最小检出量为2．3x10cfu／mL；应用该法对10只RA病鸭的组织样品检测显示，脑组织检出率最高，其次为心血、肝脏和脾，而肠和肌肉呈阴性。同时，PCR

3、法对RA的检出率比细菌分离鉴定法高l1．7％。本研究建立的基于16SrRNA基因序列的PCR检测方法，能够检测主要流行于浙江地区的4种血清型RA，具有特异、灵敏和快速的优点。关键词：16SrRNA；鸭疫里默氏杆菌；PCR检测中图分类号：$852．61文献标识码：A文章编号：1008-0589(2014)01—0050—04EstablishmentofthePCRforrapiddetectionofdiferentserotypesofRiemerellaanatipestiferbasedOl3the16SrRNAgeneTANQiu—shan，，GAOLi．rong，

4、WANGXiao—du，JIANGZhao-jtm，SHENQiang，ZHANGXian-fu’f1．TheNurturingStationfortheStateKeyLaboratoryofSubtropicalSilviculture，Lin’an311300，China；2CollegeofAnimalScience&Technology，ZhejiangA&FUniversity，Lin’an311300，China)Abstract：ToestablisharapiddiagnosticapproachofRiemerellaaliatipestiferdise

5、ase，thePCRassaywasdevelopedfordetectionofR．anatipestiferwithapairofprimersdesignedaccordingtotheconservedregionof16SrRNAsequenceofR．anatipesfiferATCC11845strain(Acc．No：CP003388．1)inNCBI．Theresultsindicatedthata698bpspecificDNAfragmentwasabletobeamplifiedfrombothstandardR．anatipestiferstrai

6、ns(includingserotypeof1，2，10and11)andclinicalsampleswithadetectionlimitof2．3×10cfu／mL．butunabletobeamplifiedfromE．coljandSalmonellaisolates．Inaddition，DifferenttissuescollectedfromR．aliatipestiferinfectedducksweretestedbythePCRassay,theresultsshowedthatmehiestR．aliatipestiferdetectionratew

7、asfromcerebra1tissue．followedbyheanblood，then1iverandthespleen，butnotdetectedfromintestineandmuscle．While，comparedwithbacterialisolationmethod，detectionratebyPCRassaywas11．7％higher．TheseresultsindicatedthatthePCRassaybasedon16SrRNAgeneisspecific，sensitiveandra