河北省邯郸市不可分群脑膜炎奈瑟菌聚合酶链反应基因分型-论文.pdf

《河北省邯郸市不可分群脑膜炎奈瑟菌聚合酶链反应基因分型-论文.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、山西医药杂志2014年6月第43卷第11期ShanxiMedJ，June2014，Vo1．43，No．11·医学检验·河北省邯郸市不可分群脑膜炎奈瑟茵聚合酶链反应基因分型赵丽萍黄亮闫永飞张治芳郭娜娜马艳霞郭瑞玲邓建流行性脑脊髓膜炎(简称流脑)是由脑膜炎奈合酶链反应(PCR)基因分型[3]。瑟菌(Neisseriameningitidis，Nm)感染人体所致的1材料与方法急性呼吸道传染病]。流脑是一种冬春季常见的1．1材料人际感染传染病，它起病急、传播快、病死率高，是菌株分离自2009—2012年健康带菌者；聚合一种较严重的急性传染病。Nm根据其荚膜多糖酶链反应(PcR)引物参照中国疾病预防控制

2、中心的不同，可以分为13个血清群，其中95的病例(中国CDC)扩增Nm所用的引物(见表1)，由上海是由A、B、C、Y和W135血清群菌株引起的_2j。由生工有限公司合成提供；巧克力双抗平板购自北京于传统的分离鉴定方法的局限性，导致了大量表型友康基业生物科技有限公司，生化反应条购自法国特征符合但是不能分群的菌株，为了对这些菌株进梅里埃公司，Nm诊断血清购白美国Remel公司。行分群鉴定，为实验室诊断和流行病学提供科学依核酸提取试剂盒购自Qiagen公司。Taq酶、dNTP据，开展了此项研究。本研究对从2009—2012年混合物、lO×PCR缓冲液、6×上样缓冲液(Loading健康人群中分离得到

3、的68株不可分群Nm进行聚Buffer)、MarkerD均选自上海生工有限公司。表1扩增Nm种属及常见群所用引物1．2方法括以下成分：dNTP4FL、10×缓冲液5L、101．2．1模板制备：参照试剂盒说明书。gmol／L弓f物各2L、MgC12(25tool／L)6肛L、Taq1．2．2PCR反应程序：PCR反应体系(50L)包DNA聚合酶3U，将上述成分充分混匀后，加入制备好的DNA模板4L。循环参数为：94。C5作者单位：056008河北省邯郸市疾病预防控制中心急rain，92。C3OS，56℃35S，72℃35S，36次循环；性传染病防治科最后72℃延伸10min。PCR产物用2琼脂糖

4、凝通信作者：邓健，Email：dengjian1962@sina．com胶电泳，MarkerD作参照。山西医药杂志2014年6月第43卷第11期ShanxiMedJ，June2014，Vo1．43，No．112结果及出现疫情后的防控措施的落实等问题。用PCR2．1Nm种属鉴定：68株不可分群Nm中有52的方法鉴定Nm是十分必要的。株均扩增出CrgA基因特异性片段。分群结果显示，68株菌中有52株NmCrgA2．2Nrn分群鉴定：52株菌中有15株菌扩增出基因阳性。对52株进行PCR分群鉴定，其中A群ORF一2基因片段，电泳条带大小为400bp(A群)，15株，B群1O株．C群22株，29E群1

5、株，还有4株1O株菌扩增出SIAD(B)基因片段，电泳条带大小未得到结果。从这个结果我们可以得知，细菌变异为450bp(B群)，22株菌扩增出SIAD(C)基因片前的血清群分布特点，以C群最多。这里还有4株段，电泳条带大小为250bp(C群)，1株菌扩增出菌未得到结果，4株未分到具体群的Nm其血清群ctrA(29E)基因片段，电泳条带大小为667bp(29E有可能为D、I、K、H血清群范围内，或者可能为其群)，其余菌株未扩增出条带。见图l。他新的血清群，需要进一步确认。下一步，我们打算用多位点测序分型(MIST)分子分型方法j，MLST技术则是通过测定相关菌株的多个看家基因，并赋予相应数值，生

6、成等位基因谱，对菌株进行分型，弥补了传统分型法的不足。通过MIST分子分型方法使我们更加详细地了解流脑阳性标本的特征，为我们对流脑患者的临床诊断和流行病学调查提供有力的理论依据和实践基础。通过PCR技术对Nm分群，可以了解菌株在变异前的l～5：mL清群种属、A、B、C、29E；M：MarkerD血清群的分布特点，完善流脑病原菌监测的内容，图1Nm分群各PCR扩增产物电泳图3讨论保证监测质量，对流行病学研究和实验室诊断有近年来随着抗生素的大量使用，用传统的分离着极其重要意义。参考文献方法鉴定到的Nm，其中变异菌株占到的比例逐年[1]尹建雯，周永明，高援．云南省6株c群脑膜炎奈瑟菌分子牛增大。本次

7、研究中的68株自健康人群鼻咽拭子中物学特征分析EJ3．预防医学情报杂志，201l，27(5)：347-349．分离培养，用传统表型特征鉴定为不可分群Nm菌[2]胡绪敬．中国流行性脑脊髓膜炎流行病学研究[J]．中华流行株，用PCR方法确定52株Nm，由于细菌的基因突病学杂志，1991，12(3)：136—139．变，增加了实际检测难度。如果按病原菌的表型特[3]张力，邵祝军，徐丽．鉴别脑膜炎奈瑟菌A