iTRAQ结合2DLC-MS／MS技术鉴定健康和死皮橡胶树胶乳差异表达蛋白-论文.pdf

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1、江西农业大学学报2014，36(3)：650—655http：／／xuebao．jxau．edu．cnActaAgricuhuraeUniversitatisJiangxiensisDOI：10．13836／j．jjan．2014106袁坤，王真辉，周雪梅，等．iTRAQ结合2DLC-MS／MS技术鉴定健康和死皮橡胶树胶乳差异表达蛋白[J]．江西农业大学学报，2014，36(3)：650—655．iTRAQ结合2DLC-MS／MS技术鉴定健康和死皮橡胶树胶乳差异表达蛋白袁坤，王真辉，周雪梅，邹智，杨礼富(中国热带农业科学院橡胶研究所，农业部橡胶树生物学与遗

2、传资源利用重点实验室，海南儋州571737)摘要：橡胶树死皮(Tappingpaneldryness，TPD)是限制天然橡胶产量提高的关键因子之一，鉴定健康和死皮橡胶树胶乳差异表达蛋白对阐明橡胶树死皮发生机制具有重要意义。研究首次采用同位素标记相对和绝对定量(Isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation，iTRAQ)结合二维液相色谱串联质谱(Two—dimensionalliquidchromatography—tandem1TIaSSspectrometry，2DLC—MS／MS)技术对健康和死皮橡胶树胶乳

3、蛋白质组的差异进行研究。结果显示，有l6个蛋白差异表达，其中，在死皮树中表达上调的蛋白有2个，下调的蛋白有14个。进一步应用实时荧光定量RT-PCR对其中6个差异蛋白的基因进行表达分析，发现其表达趋势与蛋白质组水平的研究结果一致。功能分析显示，这些差异蛋白主要与细胞程序性死亡(如TCTP、HSP70、CaM、cysteineprotease等)和橡胶生物合成(如SRPP和diphosphomevelonatedecarboxylase)相关，从蛋白质组学角度进一步验证了橡胶树死皮发生过程中涉及细胞程序性死亡和橡胶生物合成途径。关键词：橡胶树；死皮；iTRA

4、Q；2DLC—MS／MS；细胞程序性死亡；橡胶生物合成中图分类号：$794．1．02文献标志码：A文章编号：1000-2286(2014)03-0650—06TheIdentificationofDiferentiaUyExpressedLatexProteinsinHealthyandTappingPanelDryness(TPD)HeveabrasiliensisTreesbyiTRAQand2DLC—MS／MSYUANKun，WANGZhen．hui，ZH0UXue—mei，Z0UZhi．YANGLi．fu(RubberResearchInstitu

5、te，KeyLaboratoryofBiologyandGeneticResourcesofRubberTree，MinistryofAgriculture。Danzhou571737，China)Abstract：Thetappingpaneldryness(TPD)inHeveabrasiliensisisoneofkeyfactorslimitingthein—creaseofnaturalrubberproduction．Theidentificationofdifferentiallyexpressedlatexproteinsintheheal

6、thyandTPDtreesisveryimportanttoelucidatingtheTPDmechanism．Inthisexperiment，theiTRAQand2DLC—MS／MSwerefirstusedtostudythedifferencesbetweenhealthyandTPDtreelatexproteomes．Theresultsshowedthat16proteinswereexpresseddifferentially，including2proteinsup—regulatedand14onesdown—regulatedi

7、nTPDtrees．Thecorrespondinggenesof6differentiallyexpressedproteinswereanalyzedbyrealtimeRT—PCR．Itwasfoundthattheexpressiontrendsofthegenesaccordedwiththeresultsattheproteome收稿日期：2013—11—27修回日期：2014—03—31基金项目：中央级公益性科研院所基本科研业务费专项(YWFZX2008-12)、海南省重点科技项目(90107)和现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-3

8、4—02A)作者简介：袁坤(1979～)，女，副研究员，博士，主要