基于iTRAQ技术的牙鲆雌雄性腺差异表达蛋白的鉴定及分析

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1、学校代码：10264研究生学号：M150150339上海海洋大学硕士学位论文基于iTRAQ技术的牙鲆雌雄性腺差异题目：表达蛋白的鉴定及分析iTRAQ-basedquantitativeproteomicanalysisforidentificationofgonad英文题目：differentiallyexpressedproteinsinParalichthysolivaceus专业：渔业研究方向：鱼类发育生物学姓名：向玉婷指导教师：张俊玲二O一八年四月九日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是

2、本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论

3、文。保密□，在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注罗祖玉复旦大学教授主席吴超群复旦大学教授委员施志仪上海海洋大学教授委员付元帅上海海洋大学副教授秘书答辩地点水产与生命学院C217答辩日期2018.05.23上海海洋大学硕士学位论文基于iTRAQ技术的牙鲆雌雄性腺差异表达蛋白的鉴定及分析摘要牙鲆（Paralichthysolivaceus,P.olivaceus）隶属鲽形目（Pleuronectiforms）、牙鲆属（Parali

4、chthys），是我国重要的一类海水经济鱼类。在牙鲆生长发育过程中，雌雄个体间存在明显差异，雌性个体大而且生长迅速。因此，研究牙鲆鱼类的性腺分化与发育机制有利于在生产上偏向单性养殖，具有重要的经济应用前景。近年来，较多的研究集中在牙鲆性腺发育相关基因的克隆与表达分析，但在蛋白水平关于牙鲆雌雄性腺差异蛋白质的表达研究较少，因此，研究牙鲆雌雄性腺差异蛋白质组学对于揭示其性腺发育的分子机制具有重要的理论意义。相对和绝对定量同位素标记技术（isobarictagsforrelativeandabsolutequantitation，iTRAQ）是在蛋白组学上发

5、展起来的一项新兴的生物技术，它可以同时标记8种不同样品，进行相对和绝对定量分析，此项技术可用于定性与定量同步进行，具有灵敏性高、高通量、分离能力强、结果可靠等特点，近年来，被应用在多种学科和领域。本研究运用iTRAQ技术，对一龄性腺发育II期牙鲆雌雄性腺中蛋白质组进行定量和定性分析，通过TripleTOF5600质谱仪系统进行质谱分析，产生二级谱图数、解析的二级谱数分别为361050，51910；实验鉴定到至少包含2个unique肽段的蛋白数为1444，占总蛋白数的I上海海洋大学硕士学位论文51.36%；鉴定到最多的肽段长度为11，其平均长度为13.2

6、8，符合肽段长度合理范围；以差异倍数≥1.5或者≤0.67倍，P-value≤0.05的条件下，蛋白显著差异数量总共为191，其中上调蛋白118个，下调蛋白73个。对差异蛋白进行GO富集分析，在生物进程中富集到了与性腺相关的功能条目：雌性性别分化（Femalesexdifferentiation）、胚胎发生（Embryonicmorphogenesis）、分化过程中细胞形态发生的正向调节（Positiveregulationofcellmorphogenesisinvolvedindifferentiation）、ERK1和ERK2级联的调节（Regu

7、lationofERK1andERK2cascade）、类固醇激素受体信号通路的调节（Regulationofsteroidhormonereceptorsignalingpathway）、精子发生（Spermatogenesis）、雄性配子世代（Malegametegeneration）、生殖细胞发育（Germcelldevelopment）等。其差异蛋白主要存在于细胞质膜、性染色质和细胞骨架中；对差异蛋白Pathway富集分析，发现在类固醇生物合成（Steroidbiosynthesis）、MAPK信号通路（MAPKsignalingpathway

8、）、Wnt信号通路（Wntsignalingpathway）、孕酮介导的卵母细胞成熟（Prog