注重“细节”保证“细胞培养技术”实验教学的顺利进行.pdf

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1、中国西部科技2013年04月第12卷第04期总第285期67注重“细节"保证“细胞培养技术"实验教学的顺利进行李卫红张海燕舟王学江(首都医科大学基础医学院，北京100069)摘要：细胞培养技术是医学院校研究生从事课题研究必备的一项基本技能，因此也是研究生的必修课程之一。为使学生在较短的时间内掌握有关细胞培养的基本技术，实验课的实施尤为关键，而注重实验课程中的每一“细节”，则是这门课程的精髓和灵魂。关键词：细胞培养；实验教学；细节DOI：10．3969／j．issn．1671—6396．2013．04．033细胞培养技术是生

2、命科学研究中一项不可缺少的基本技后，分发分装好的小包装液体：基础培养基、胎牛血清、青术，也是从事生命科学研究的研究生必备的基本实验技能【l。】。霉素、链霉素、胰蛋白酶、PBS各一份。“实用动物细胞培养技术”作为一门课程，已在首都医科大1．2学生进入实验室前的准备学开设将近3O年。随着生命科学的不断发展，该课程内容也学生进入细胞培养室操作前，需穿着干净整洁的白大不断调整，增加最新的进展，但它的初衷与精髓不变，那就衣、套鞋套、用肥皂洗手。携带2％新沽尔灭浸泡的纱布进是“实用与实践”【4】。“实用”是指在理论课教学中不仅讲解基入

3、无菌操作间，用于随时清洁台面，以保持台面整洁、卫生。本的技术方法，同时还不断增加最新的关于细胞培养技术的2常用液体的配制介绍，如“干细胞研究进展”；“实践”是在实验教学中结合理细胞培养液是维持细胞生存、生长所需的基本溶液。根论课教学内容，既安排学生完成最基本的培养技术方法，同据其用途不同包括：平衡盐溶液、合成培养液、无血清培养时还不断增加综合性、创新性实验，如“小鼠骨髓干细胞的基等。尽管这些液体己完全商品化，但设计这一实验的目的分离”，“MTT法测定细胞增殖能力”，使学生在学习这门课是为了使学生详细了解细胞生长所需的营养成

4、分、生理环境程期间有大量的时问自己动手完成各种实验。总结多年的教(如渗透压、pH值等)，并且能够掌握细胞培养所需液体学实践经验，我们认识到：合理安排，注重实验教学中的每的配制技术及无菌过滤过程。一环节，而每一“细节”则是保证研究生“实用动物细胞培养2．1课前准备技术”课程实验课教学顺利进行的关键。本文以几个基本实在实验课前将实验所需的容器仔细清洗并经过干热灭验为例，谈谈在实验教学实施过程中的“细节”。菌；准备各种分析纯的试剂、纯水、天平、称量纸、药勺等；1实验课准备的基本内容常用的几种过滤器；各种容量的容量瓶、烧杯、玻璃棒

5、以及1．1实验材料的准备分装液体用的灭菌过的血清瓶。在实验课前根据不同实验内容、学生分组(每2名学生2．2实验课液体配制为一组)情况准备实验试剂、手术器械、耗材等，以此保证配制的液体包括：DMEM培养基、水解乳白蛋白、平学生在细胞培养实验课中所需的所有试剂均为无菌。具体内衡盐溶液如含钙镁的Hank’s液、无钙镁PBS、0．1％的醋酸容包括：(1)原代培养用的手术器械，如外科剪、外科镊一溶液。组，眼科剪、眼科镊一组，经医用酒精擦洗，分别用牛皮纸2．3实验课环节包装，高压灭菌备用。(2)移液所用玻璃吸管按照直管1支、所配液体全

6、部是后面实验所需液体。在配制10X含钙弯管1支、lmL管一支、5mL管1支为一套，装在不锈钢镁的Hank’S液时，指导老师随时强调在溶解各种成分时要桶中，放鼓风干燥箱中180℃干烤灭菌2h备用。(3)普通试严格按照配方顺序；一定要在完全溶解后添加，并且充分混管作为吸管的套管，洗净晾干后、用拷贝纸包上口，装在铝匀；待所有药品全部加完并充分混匀后，如果完全澄清透明饭盒中l80℃干烤灭菌2h备用。(4)各种容量的血清瓶、烧才能加入指示剂酚红，充分混匀后分装；如果加入溶解后的杯、玻璃平皿等洗净晾干后包上口，放鼓风干燥箱中l80℃C

7、aCL2出现淡淡的白色浑浊，即说明配制失败，就要和同学干烤灭菌2h备用。(5)分装液体的EP管、冷冻管、瓶盖、分析讨论、找出原因，再重新配制。0．1％的醋酸溶液、PBS、胶塞、枪头等用15磅25min高压灭菌后备用。(6)液体分1X的Hank’S液采用10磅20min高压灭菌，培养基则需要装，根据每小组每个实验所需的量分装，如细胞传代实验，每过滤除茵。小组需要基础培养基为8．9mL，胎牛血清lmL，l万单~j．／mL3鼠尾胶原的制备的青霉素、链霉素0．2～0．4mL，0．25％胰蛋白酶1．5mL，胶原是细胞生长的良好基质。

8、培养瓶或培养皿经过胶原PBS1．5mL。(7)实验课前将准备好的实验所需物品，如4处理能促进细胞及组织块贴壁，改善生长表面的性质，从而只套管放于试管架上，一桶吸管，2个培养瓶放置于超净工有利于细胞生长及机能表达【5】。大鼠尾富含I型胶原，而大作台中。打开超净工作台的紫外灯灭菌半小时。关闭紫外灯鼠又是各种