改良碳青霉烯灭活试验.doc

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1、改良碳青霉烯灭活试验（ModifiedCarbapenemInactivationMethod, mCIM）检测肠杆菌科细菌中的碳青霉烯酶一.    何时检测？基于流行病学或感控目的。备注：即使mCIM结果呈阳性，亦无需修改碳青霉烯类药敏试验结果。目前不推荐mCIM试验用于常规检测。二.   方法：美罗培南灭活试验三.    试剂和材料   1.      TSB （2ml）2.      美罗培南纸片（10ug）3.      1-ul和10-ul接种环4.      营养肉汤（如MH肉汤、TS

2、B肉汤）或MHA平板（100mm或150mm）5.      美罗培南敏感质控株-大肠埃希菌（ATCC25922）四.    步骤          1.      取1ul接种环的过夜培养纯菌落于2mlTSB肉汤中2.      震荡混匀10-15秒3.      每管放入一张含10ug美罗培南的无菌纸片，确认纸片浸没于菌悬液中4.      35℃±2℃大气环境孵育4小时±15分钟5.      孵育结束时，立即用营养肉汤或生理盐水制备0.5麦氏浊度的大肠埃希ATCC25922菌悬液（直接菌悬

3、法）6.      菌悬液制备和平板涂布必须15分钟内完成，干燥3-10分钟7.      用10ul接种环将美罗培南纸片从TSB肉汤中取出，将纸片贴于试管内壁，轻轻按压以挤去纸片上多余水分，然后将纸片取出贴于已涂布有大肠埃希菌ATCC25922的MHA平板上。100mm的MHA平板最多贴4张纸片，150mm的MHA平板最多贴8张纸片（图1）。8.      倒置平板，35℃±2℃大气环境孵育18-24小时9.      量取抑菌圈直径图1.10ul接种环取出美罗培南纸片（a）；将纸片贴于试管内壁

4、并挤去多余水分（b）；同一接种环取出纸片（c）并贴于MHA平板上（d）五.    结果解释：见图2a和2b1.      碳青霉烯酶阳性：美罗培南抑菌圈直径为6-15mm 或直径为16-18mm但抑菌圈内有散在菌落。若待测株产生碳青霉烯酶，纸片中的美罗培南被该酶降解，结果为无抑菌圈或抑制大肠埃希菌ATCC25922的活性降低。2.      碳青霉烯酶阴性：抑菌圈直径≥19mm。若待测菌株不产碳青霉烯酶，纸片中的美罗培南不被水解，仍能抑制大肠埃希菌ATCC25922的生长。3.      中性：抑

5、菌圈直径为16-18mm，无法判断是否存在碳青霉烯酶（见备注）图2a.阴性对照BAA1706（A）和阳性对照BAA1705（B）图2b.碳青霉烯酶产生株。备注：mCIM结果阳性六.    备注：1.     中性结果a)       检查待测菌株和大肠埃希菌ATCC25922的纯度b)       检查美罗培南的质控结果c)       重复mCIM试验d)       如果结果仍为中性，建议检测碳青霉烯酶基因2.     某些菌株可能出现美罗培南抑菌圈内出现散在菌落，若抑菌圈直径≤18mm，结果

6、判定为阳性；若抑菌圈直径≥19mm，结果判定为中性结果。3.     CLSI目前只推荐该标准方法用于肠杆菌科细菌中碳青霉烯酶的检测七.    报告：1.     阳性：报告“检测到碳青霉烯酶”2.     阴性：报告“未检测到碳青霉烯酶”3.     中性：报告“无法判断是否产碳青霉烯酶，联系实验室进行讨论”八.    附加试验和报告1.     报告mCIM结果用于感染控制或要求提供流行病学相关信息2.     即使mCIM结果呈阳性，亦无需修改碳青霉烯类药物敏感性试验结果九.    质控：1

7、.      每天测试阳性和阴性质控对照株2.      碳青霉烯酶阳性株：肺炎克雷伯菌ATCCBAA17053.      碳青霉烯酶阴性株：肺炎克雷伯菌ATCCBAA17064.      美罗培南纸片的质控按CLSI要求执行5.      资料来源：CLSIM100S-27th