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1、血清甲状腺激素(T3、T4)的磁酶联免疫测定法——方法学探讨及临床应用【摘要】本技术为酶联免疫系统与磁性微粒分离技术相结合的一种测定血清T3、T4的方法，并使用了一种高亲合力的抗体。血清中的T3、T4与一定量的荧光素T3、T4衍生物竞争性地和少量酶标T3、T4单克隆抗体相结合，并使用FANS置换剂，把T3、T4从蛋白质屮置换出来。方法学检测数据如下：最小检出量T3为0.2ng/mL,T4为5.Ong/mL；回收率：T3为1.03,T4为0.98；批内变异系数T3为3.5%,T4为5.1%；批间变异系数T
2、3为4.6%,T4为5.1%；两种抗血清对相应抗原的同类物的交叉反应率低，用本方法与放免法同时测定30份标本，同一激素的两种方法测定结果呈显著相关。【关键词】甲状腺激素磁酶联免疫测定近年来，经过科研工作者的努力，先后建立并发展了多种使用非放射性标记物的免疫测定法，其中包括磁分离酶联免疫测定法(MAIA)o国内外关于人血清T3和T4的MAIA的论著己有多篇，我们于1995年来对本院多例病人和正常人进行了血清屮的T3、T4测定，其屮30份病人标本同时用放免法(RM)作对照，兹将结果报告如下。1材料和方法1.
3、1材料本实验使用的是北京倍爱康生物技术有限公司提供的T3.T4试剂盒。(1)抗T3、(T4)衍生物1瓶:牛碱性磷酸酶标鼠抗T3、(T4)单克隆抗体的Tris缓冲液；羊和牛的血清蛋口；叠氮化纳0.2%W/V,20mLo(2)T3、(T4)、衍生物1瓶：荧光素标T3、(T4)、衍生物的Tris缓冲液;羊、牛血清蛋白;0.19%W/VANS：0.2%W/V叠氮化纳，20mLo⑶分离剂(0.6%)1瓶：与磁性微粒共价结合的羊抗荧光素抗血清0・6%W/V的Tris缓冲液：0・5%W/V牛血清蛋白;0・2%W/V叠
4、氮化钠，40mLo(4)清洗浓缩液1瓶:表面活性剂和防腐剂的Tris缓冲液,14.3mLo(5)基质2瓶：为单磷酸酚肽(PMP),辅酶的缓冲液15.OmLo(6)终止液1瓶:氢氧化钠与螯合物的缓冲液100mL,pH>10o(7)对照液1瓶：冻干人血清，0.01%W/V硫汞散复制后为lmLo(8)标准液各6瓶:T3盒内含0,0.5,1.0,2.5,5.0,10.0ng/mL的T3人血清溶液;0・2%W/V叠氮化合物ImL；T4盒内含0,20,40,80,150,300ng/mL的T4人血清；0.2%
5、W/V叠氮化合物,0.7mLo1.2标本采集取5.0汕静脉血至玻璃试管，不加添加剂，在室温中凝结，离心,取血清部分。1・3测定方法每份标本均做双份测定。将T3、T4清洗液稀释至100mL,对照液加蒸憾水ImL稀释，测定时按表1顺序加液至12X60nm塑料试管屮。加液毕，37°C水温孵育15分钟，加入过量与磁性微粒结合的抗荧光素抗体，它快速、特异地结合成T3、T4单克隆抗体复合物，不用离心,就能在磁场中沉淀，洗涤2次，滤干，向试管内加入60mLPMP.37°C水温孵育15分钟，加入200mL终止液、显色，
6、上架沉淀10分钟，在SER0ZYME-T型内分泌定量测定仪上用492nm/550nm/630血波长读取吸光度(0D)值。2结果(1)标准曲线，从零标准管的0D值减去空白管的0D值得A值，从各标准管的0D值减去空口管的0D值得B值，以(B/A)%为纵座标，各标准管的T3(T4)标准液浓度为横座标，即可绘出T3(T4)测定的标准曲线。同样计算各标本管的B/A值，从标准曲线查出相应浓度。用本法做出的标准曲线T3的可测范围为0.3~10.Ong/mL,T4为6.0〜300ng/mLo(2)最小检测量(灵敏度)：
7、根据实验的标准曲线计算，本方法测T3的最小检测量为0.2ng/mL,T4为5.Ong/mLo(3)批内变异系数：同一标本进行20次测定，批内变异系数T3为2.7%〜3.5%,T4为2.0%〜4.3%.⑷批间变异系数：将标准曲线范围内几个不同浓度的标本，分别用20盒不同批号的试剂检测,批间变异系数T3为4.6%,T4为5.1%。(5)将20份已知T3(T4)浓度的血清中加入不同浓度的T3(T4)标准液，测定结果按下列公式计算回收率：(6)特异性：标本内加入不同浓度的IgE、hCG后，检测出来的结果表明本方
8、法无交叉反应。(7)稳定性：清洗液加蒸馄水或去离子水稀释后，2〜8°C可贮存到失效，终止液在2〜8°C或室温下，pH值不改变。衍生物，抗体在室温内放置2小吋，并在1天内使用，测定结果无明显差异。(8)MATA与RTA的比较：用本法和本院建立的RTA法同时测定30份血清标本，包括高值，低值及正常值，以RIA测定值对MAIA测定值作图，经相关分析后得出如下结果,T3:y=0.98x-0.81,r=0.980,P<0.01；T4：y=l.O
