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1、贵州化工2005年2月··20GuizhouChemicalIndustry第30卷第1期红曲霉的分离及其红曲米的生产1,31,31,32,32,3雷帮星税小波杨国彬梁宗琦刘爱英(1.贵州赤天化股份有限公司,贵州贵阳,550018;2.贵州大学真菌资源研究所,贵州贵阳,550025;3.贵州大学—赤天化微生物工程研究中心,贵州贵阳,550018)摘要根据红曲霉菌的性质,用双抗淀粉培养基从红曲米中分离纯化得到一株红曲霉菌株(MonascusFM1),用该菌种生产的红曲米色泽为紫红色,总色价为1430U/
2、g。关键词红曲霉红曲分离红曲色素+中图分类号TQ925.7文献标识码A文章编号1008-9411(2005)01-0020-03红曲在我国的应用距今已有1000多年历史,它1.4.1淀粉培养基是以红曲霉(Monascusspp.)为主发酵生产的一种蛋白胨3%,可溶性淀粉5%,饴糖6%,Mg2独特的米曲,具有耐酸、耐高温的特性:中医认为红SO40.05%,KH2PO40.05%,琼脂2%,pH自然。曲性温、味甘、无毒、入脾胃二经,可健脾、燥胃,有活1.4.2分离培养基血的功能。现代科学研究证明红曲中含有
3、的莫纳卡在淀粉培养基中加入青霉素30U/ml,链霉素林K(MonacolinK)具有强力抑制胆固醇合成的作30U/ml。用,有降低血脂的功能,在人体血液中浓度只有达到1.4.3沙氏培养基(Sab),马铃薯培养基(PDA),查0.001～0.005ug/ml时,胆固醇的生物合成就受阻;氏培养基(Cza)红曲中的γ-氨基丁酸(γ-GABA)还有降低血压的[3]参照范秀容等方法。作用;此外,红曲对防治贫血、防癌、降低血糖、抗菌2方法防腐、抗疲劳等具有一定作用。因此,目前红曲已广泛用于食品添加剂、降血脂药物及
4、保健食品等方2.1红曲霉菌株的单孢子分离方法[1]面。取1g红曲米(或无菌研磨的红曲米粉)加入红曲中的红曲霉属于真菌门(Enmycophyta)、9ml无菌水中,充分摇匀,从中取0.3ml加入9ml无子囊菌亚门(Ascomycetes)、不整子囊菌纲(Pleto2菌水中,摇匀。依次再作2次稀释,共4个稀释度,mycetes)、散囊菌目(Eurotiale)、红曲科分别为10、300、9000、270000倍。第3、4个稀释度(Monascaceae)、红曲属(Monascus)的真菌。它是一取1ml,
5、第2、1个稀释度取0.5ml,加入9cm平皿的种腐生真菌,生长最适pH为3.5～5.5,生长温度26双抗培养基中,均匀涂布,32℃培养2～6天,显微镜[2]～42℃,能利用多种碳氮源。本文报道了红曲霉观察培养皿中孢子的萌发情况,选择单个孢子进行的分离,红曲米的生产及其色价的检测。标记。待其萌发形成小菌落后移接至斜面培养基。2.2红曲米直接分离法1材料取红曲米粒直接放置于双抗培养基中,每个平1.1主要实验仪器皿5～6粒,32℃培养2～6天,观察培养皿中红曲霉6010紫外-可见分光光度计(上海安捷伦公司的
6、生长情况,选择纯菌落进行移接。产品);生物显微镜,培养箱,摇床等及微生物实验室2.3形态鉴定方法常规仪器。取纯化后的红曲霉菌种,将其点种到Sab、Cza、1.2主要实验原料PDA和沉淀粉琼脂平皿培养基中,每种培养基重复乙醇,葡萄糖,蔗糖,MgSO4,FeSO4,KCl,3个平皿,在32℃培养14d,然后在4、7、14d时测定NaNO3,K2HPO4(均为分析纯);蛋白胨,可溶淀粉,其菌落直径,并对红曲霉菌落培养特征进行描述,粘酵母膏,琼脂(均为生化试剂);马铃薯,饴糖,大米片显微镜观察红曲霉菌丝和产孢
7、结构的显微特征。(市售);青霉素,链霉素(注射用)。2.4红曲米的生产1.3红曲米2.4.1菌种制备购于国内某红曲厂,并已在冰箱中开放式冷藏将红曲霉菌种接种于Sab斜面培养基上活化24年。次,之后接种于Sab液体培养基上,摇床培养7d,得1.4培养基生产菌种。2005年2月雷帮星等:红曲霉的分离及其红曲米的生产第30卷第1期·21·2.4.2培养基制备下。取50g大米装入250ml三角瓶中(重复3),加入表1不同培养基对FM1菌株生长的影响40%的水,浸泡50min,121℃灭菌30min,冷却后用培
8、养时间菌落直径/Colonialdiameter(mm)CulturetimeSab培养基PDA培养基Cza培养基淀粉培养基无菌玻棒将瓶中米饭搅散。4天22×2220×2316×1726×282.4.3接种7天31×3429×3327×2739×40无菌操作取5ml液体红曲霉菌种接入三角瓶14天58×6159×6047×4874×74中,搅拌均匀,接种量10%。菌落特征描述:菌株FM1在淀粉琼脂培养基上2.4.4培养生长较Sab、PDA和Cza上好,表现
