高原肺动脉高压大鼠重返平原后肺组织中5-HTT基因表达变化.pdf

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1、第26卷第3期菏泽医学专科学校学报V0L．26N0．32014年JOURNALOFHEZEMEDICALC0LLEGE20l4DOhlO．3969／j．issn．1008—4118．2014．03．05高原肺动脉高压大鼠重返平原后肺组织中5-HTT基因表达变化付丹丹(菏泽医学专科学校，山东菏泽274000)摘要：目的探讨高原肺动脉高压大鼠重返平原后肺组织中5一羟色胺转运体基因表达变化。方法46只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(C组，8只)，高原低压低氧组(H组，8只)，重返平原组(R10组，R20组，R30组，每组10只)，正常对

2、照组大鼠置于平原常压常氧处喂养，高原低压低氧组和重返平原组置于模拟海拔5000米高原环境喂养建立肺动脉高压动物模型，重返平原组大鼠建立肺动脉高压动物模型后再于平原饲养，应用RT—PCR方法检测各组大鼠肺组织中5一羟色胺转运体基因表达水平。结果与正常对照组(O．11±0．03)相比较，5一羟色胺转运体mRNA在高原低压低氧组表达明显增高(0．92±0．03，P<0．01)，重返平原组10d，20d组表达增高(0．57±0．02，0．38±0．02，P<0．01)，随重返平原时间的延长其表达量不断下降，R30组表达无差异(0．14±0．04，

3、Jp>0．05)。结论5一羟色胺转运体基因在高原低压低氧环境中表达量明显增高，重返平原后，5一羟色胺转运体基因表达降低并逐渐恢复。关键词：高原；肺动脉高压；5～羟色胺转运体；重返平原中图分类号：R544．16文献标识码：A文章编号：1008—4118(2014)03—0013—02高原肺动脉高压(Highaltitudepulmonaryhyper—TRIzol试剂购于invitrogen公司，TIANScriptcDNA第tension，HAPH)是高原地区的常见病、多发病，同时也一链合成试剂盒及2xTaqPCRMasterMix购白天

4、根是适应生理的重要环节t”，对高原人群的身体健康构生化科技有限公司，引物由上海捷瑞生物工程有限成了严重威胁，关于其具体发病机制目前仍未完全公司设计、合成，低压氧舱(中航工业贵州风雷航空阐述，有关学者曾提出：“解决这一问题的唯一办法军械公司研制)。就是将病人转到低海拔地区”。相关临床及实验研1．2方法1)动物的分组与处理方法：清洁级Wi-究证明，在一定条件下5一羟色胺(5一HT)可以引起肺star雄性大鼠46只，体重180~220g，按体重随机分为血管痉挛、收缩以及结构的重塑，最终会引起肺动脉正常对照组(C组8只)、高原低压低氧组(H组，8

5、只)高压的形成，但发挥这种作用，需要通过5一羟色胺转和重返平原组(Ri0，R20，R30，各10只)。C组置于平运体(5一HTT)将5一HT转入细胞内后才能充分发原处喂养30d，H组和R组饲养于低压氧舱中模拟海挥。本实验通过观察高原低氧环境中肺动脉高压大拔5000米环境30d，每天22h(出舱2h，打扫清洁喂鼠重返平原常压常氧以后肺组织中5一HTTmRNA表食)，R组再于平原处喂养10d，20d和30d时，各取达变化规律，现将报道如下。lO只处理。2)标本的取材与处理方法：用20％乌拉坦5ml／kg腹腔内注射，麻醉大鼠后置于动物手术台1材

6、料与方法上，然后放血处死大鼠，取大鼠左侧下N,f组织，以蒸馏水快速冲洗肺组织，然后置于液氮中速冻，一清清级Wistar雄性大鼠46只(购于兰州大学动80。C冻存备用。3)引物的设计与合成：以大鼠5一物实验中心)，RT-PCR仪(MJResearchcompany，HTTmRNA序列为模板，应用PrimerPremier5．0软件USA)，凝胶成像分析系统(UVP，GDS8000，USA)，13第26卷第3期菏泽医学专科学校学报V0L．26N0．32014钲J0URNALOFHEZEMEDICALCOLLEGE2014设计引物。5一HTT上

7、游引物为：5GCTACAA—黧翻。b精CAAGTTCAACAACAAC一3’，下游引物为：5LGC-lOob静CACCTCTGACACATCTTC一3’；内参照18S上游弓l物为：5l_TCACTGAGGATGAGGTGGAACG一3’，下游引3讨论物：5l_TCAGTCGCTCCAGGTCTTCACG一3’。5一HTT在高原上，机体在适应环境的过程中，高原性的及18SPCR产物预期片段的长度分别为180和148肺动脉高压是其中的一个重要环节，同时，其也是一bp。4)5一HTTmRNA的检测：精确称取冻存的大鼠系列的高原性疾病的重要发生基

8、础，例如高原性的肺组织100mg，按照TRIzol一步抽提法提取细胞总红细胞增多症、肺水肿、心脏病等，是一种潜在发生RNA，按照20L体系逆转录，25L体系扩增。按的高原性疾病病程的早期阶段，