高产纤维素酶的米曲霉选育及固态发酵代谢产物对绵羊瘤胃体外发酵的影响.pdf

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1、纛懑·t0。鹱穗0高产纤维素酶的米曲霉选育及固态发酵代谢产物对绵羊瘤胃体外发酵的影响王晓磊，甄玉国。，肖君，陈雪(1．吉林农业大学动物科学技术学院，吉林长春130118；2．长春博瑞饲料集团有限公司技术中心，吉林长春130114)摘要：本试验以米曲霉为研究对象，比较米曲霉40636、41478、M、M菌株纤维素酶活，以纤维分解圈大小为初步指标，再进行固体培养，进一步研究其代谢物对绵羊瘤胃体外发酵的影响。采用单因素试验设计，4个处理分别为无添加剂、米曲霉培养物M，、M2、米曲霉培养物(AO)，培养24h进行采样，并测定培养液pH值、氨态氮

2、(NH3一N)、挥发性脂肪酸(VFA)的浓度。结果表明：纤维水解圈大小为M2>M1>40636>41478；在精粗比为5：5底物下，从整体趋势看，各处理组与对照组相比，pH4J~-略有升高(P>0．05)，具有稳定瘤胃内环境的作用；NH一N除M2组略高于对照组，其他组均降低，且各组差异不显著(P>0．05)；AO组和M2组的乙酸、丙酸、TVFA均极显著增加(P<0．01)，但两组间差异不显著(P>0．05)，M组丁酸显著高于对照组(P<0．05)。结果提示，米曲霉培养物能够维稳瘤胃pH值，增加VFA，能够调节瘤胃生理功能。关键词：米曲霉

3、；纤维水解圈；瘤胃；VFA中图分类号：$826．5文献标识码：A文章编号：0258—7033(2014)11—0046—03米曲霉(Aspergilhtsoryaze)是曲霉属真菌中的一40636和41478(中国工业微生物菌藏中心)。个常见菌种，是一种好气性真菌，它能够产生多种酶1．1．2培养基斜面培养基：PDA。CMC—Na培养系，包括纤维素酶、蛋白酶、果胶酶、糖化酶、淀粉酶基『I：羧甲基纤维素钠20g，KH~PO1．5g，MgSO0．3g，等_】～1。目前，该菌株被广泛应用于农产品酿造产业，酵母粉3g，蛋白胨2g，NaC10．3g

4、，加水至1000mL，通过固体发酵利用米曲霉所产生的复杂酶系来降解pH7．0。固体培养基：麸皮10g，NaC10．05％，MgSO原料中的纤维素、半纤维素、蛋白质、淀粉和果胶等0．05％，FeSO0．05％。刚果红染液：取刚果红0．1g，加大分子物质。米曲霉已经是联合围粮农组织和世水至100mL，使其充分溶解制成溶液。1mol／LNaC1：界卫生组织公认安全的食品级菌种，是可以直接饲取NaC15．85g，加水至100mL，使其充分溶解制成溶喂动物的微生物产品。国外最近的研究资料表明，液。米曲霉可以有效调节反刍动物瘤胃生理功能，稳定1．1

5、．3驯化将米曲霉菌株接种于纤维素固体培瘤胃pH值，是天然瘤胃微生态调节剂，降低奶牛代养基，30℃培养6d，测定菌落直径及透明圈直径，转谢疾病，提高奶牛生产性能和抗热应激的能力，有关接5次，定向驯化米曲霉。应用米曲霉对奶牛瘤胃物质发酵影响方面尚需进一1．1．4刚果红染色法纤维素诱导培养基培养米步研究。本试验以米曲霉为研究对象，比较米曲霉曲霉，菌落长成后(72h)，往平板中加入适量1mg／mL40636、41478、M，、M菌株纤维素酶活，以纤维分解圈的刚果红溶液，染色1h，弃去染液，加lmol／L的NaC1大小为初步指标，再进行固体培养，

6、进一步研究其代溶液，洗涤2次，每次5min。菌体若能分泌纤维素酶，谢物对绵羊瘤胃体外发酵的影响。则在菌落周围出现清晰的透明水解圈，测量透明圈的大小初步测定酶活。l材料与方法1．1．5孢子悬浮液制备用生理盐水将平板上的1．1米曲霉培养物的制备孢子(培养72h)洗脱，放入装有灭过菌的玻璃搅拌珠(起1．1．1菌种米曲霉M。和M：(实验室分离)，米曲霉打散作用)的三角瓶中，置于磁力搅拌器上，200r／min振荡20rain。无菌操作台5层无菌纱布过滤培养液以除收稿日期：2013-12—02：修回日期：2014—0l一15去培养液中的菌丝体，调节

7、孢子浓度为l×10，4qc保资助项目：吉林省重大科技攻关项目(2012ZDGGO06)作者简介：王晓磊(1987一)男，吉林梨树人，硕士，主要从事动物存备用。营养与饲料科学．E—mail：317000784@qq．com1．1．6固体发酵250mL角瓶，装料量分别为麸通讯作者：甄玉同，E—mail：nickzhen@263．net皮10g，KH2PO40．1％，NaC10．05％，MgSO40．05％，中囊髓每走m㈣}18删《_8·FeSO0．05％，水10mL，pH自然，121℃高压15min，表1试验日粮组成及营养成分(风干基础)冷

8、却后分别接人米曲霉40636、41478、M、M孢子悬浮液，接种量4％(以干料计)，静置培养5d，取出培养物于40~C烘2～3d，粉碎备用。1．2法1．2．1瘤胃液接种体来源选取3只体况良好，体重相近、安装