副溶血性弧菌热稳定直接溶血素基因转录水平差异研究.pdf

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1、浙江预防医学2014年8月第26卷第8期ZhejiangPrevMed，Aug．2014，Vol26，No．8·761··论著·副溶血性弧菌热稳定直接溶血素基因转录水平差异研究宋启发，叶硕，徐景野，朱国良，章丹阳宁波市疾病预防控制中心微生物检验所，浙江宁波315010摘要：目的运用实时荧光定量PCR检测24株副溶血性弧菌热稳定直接溶血素(TDH)基因转录水平差异。方法普通PCR法检测分离自患者、海产品和环境中的副溶血性弧菌tdh基因，tdh阳性菌株提取细菌总RNA后逆转录合成cDNA，检测无DNA污染后定量至同一浓度，采用实

2、时荧光定量PCR同时检测cDNA产物中tdh基因和内标基因16SrRNA的ct值，ACt等于tdh的ct值减去16SrRNA的ct值，以ACt值反应tdh相对于内标基因16SrRNA的转录水平。结果24株副溶血性弧菌的tdhCt值、内标基因16SrRNACt值和各样本两者之差的ACt值结果范围分别为18．04～25．95、8．30～10．93和8．28—15．34，ACt最大值与最小值差为7．06，最高转录水平菌株为最低菌株的133倍(AACt=2∞)。结论副溶血性弧菌tdh基因转录水平存在较大差异，该差异性形成的分子机制以

3、及与该菌的致病性的关系有待进一步研究。关键词：副溶血性弧菌；热稳定直接溶血素；转录；实时荧光定量PCR中图分类号：R155文献标识码：A文章编号：1007—0931(2014)08—0761一o4AstudyondiferenceoftranscriptionlevelofthermostabledirecthemolysininVibrioparahaemolyticusSONGQi—fa，YEShuo，XUJing—ye，ZHUGuo—liang，ZHANGDan—yangDepartmentofMicrobiology

4、．CentreforDiseaseControlandPreventionofNingboCity，Ningbo，Zhefiang，315010，ChinaAbstract：0bjectiveTomeasurethetranscriptionlevelofthermostabledirecthemolysingene(TDH)in24strainsofVibrioparahaemolyticus．MethodsTotalRNAwasextractedfromstrainsofVibrioparahaemozyticuswhi

5、chwereisolatedfrompatients．seMoodandenvironment．TheRNAwasprovedTDHpositivewithroutinePCRmethod；thenthereal—timefluorescentuuantitativePCRwascarriedouttoobtainthecycleofthreshold(Ct)ofTHDandinternalstandardof16srRNA．TranscriptionlevelofTHDcomparedwith16srRNAwasdesig

6、natedasACtwhichwascalculatedasCtvalueofTHDminusCtvalueofl6srRNA．ResultsCtvaluesofTHD．16srRNAandthedifferencebetweenthemofthe24strainswas18．04～25．95．8．3010．93and8．28—15．34respectively．ThedifferencebetweenthemaximumandtheminimumofACtwas7．06：thehighesttranscriptionlev

7、elwas133(AACt=2)timesofthelowestone．ConclusionAgreatdiferenceoftranscriptionlevelofTHDinVibrioparahaemolyticashasbeenprovedandfurtherstudyisneededtoclarifythepossiblemolecularmechanismsandrelationshipbetweenthetranscriptionlevelofTHDandpathogenicmechanism．Keywords：

8、V／br／oparahaemoZyt／cus；Thermostabledirecthemolysin；Transcription；Real—timefuorescentquantitativePCR副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus)是细菌性食物中毒的重要病原菌之一