大豆脂肪氧化酶同功酶联合鉴定技术的建立-论文.pdf

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1、河北农业科学，2014，18(2)：52—59JournalofHebeiAcuhura]Sciences编辑卡十晓东大豆脂肪氧化酶同功酶联合鉴定技术的建立马志民，秦君，杨春燕，邸锐，闰龙，张梅中，李子千，李亚璞，史晓蕾，鲍聪，许宁，封树平，张孟臣(1．河北省农林科学院粮油作物研究所，国家大豆改良中心石家庄分中心，农业部黄淮海大豆生物学与遗传育种重点实验室，河北省遗传育种重点实验室，河北石家庄050035；2．河北省农林科学院，河北石家庄050000；3．河北省科学院生物研究所，河北石家庄050081；4．河北省农业技术推广总站，河北石家庄050011)摘要：本研究目的是建立

2、一套适宜于育种后代材料脂肪氧化酶缺失类型筛选鉴定的方法。首先选择适用于近等基因系材料的消减免疫法，以单缺Lox2的J12_2作为耐受原，将含有3种Loxs的SoybeanLox(TypeI．B)作为抗原，利用该方法筛选到l株能稳定分泌Lox2单抗的杂交瘤细胞株Lox21。在解决了Lox2单抗的基础上，进一步以纯化的Loxl和Lox3作抗原，按常规方法，制备并筛选到l株能稳定分泌Loxl单抗的杂交瘤细胞株Lox1．1，4株Lox3的杂交瘤细胞株Lox3．1、Lox3．2、Lox3—3和Lox3-4；if-1用腹水诱导法生产其细胞株抗体，腹水效价在1：20000与1：800000

3、之间，经鉴定6株单抗均具有较强的特异性。以SoybeanLox(TypeI—B)作抗原制备兔多克隆抗体血清，其针对Loxl、Lox2和Lox3的效价均达到l：76800。最终建立了以兔多抗作固相抗体，Loxl一1、Lox2．1、Lox3-4分别作检测抗体的对大豆脂氧酶缺失类型进行联合鉴定的技术体系，该技术不但为无腥大豆育种提供了技术保障，还为其他同工酶检测技术的开发积累了宝贵经验。关键词：脂肪氧化酶；同功酶；单克隆抗体；多克隆抗体；双抗体夹心法；联合鉴定中图分类号：$565．1文献标识码：A、文章编号：1008．1631(2014)02-0052-08Establishmen

4、tofAJointIdentificationTechnologyofSoybeanLipoxygenasesMAZhi—min，QINJun，YANGChun—yan。，DIRui，YANLong‘，ZHANGMei—shen，LIZi-qian，LIYa—pu，SHIXiao-lei，BAOCong，XUNing，FENGShu-ping，ZHANGMeng—chen‘(1．InstituteofCerealandOilCropsofHebeiAcademyofAgricultureandForestrySciences，NationalSoybeanImprovemen

5、tCenterShijiazhuangSub-Center，NoahChinaKeyLaboratoryofSoybeanBiologyandGeneticImprovement，MinistryofAgriculture，HebeiCropGeneticBreedingLaboratory，Shijiazhuang050035，China；2．HebeiAcademyofAgricultureandForestrySciences，Shijiazhuang050000，China；3．InstituteofBiology，HebeiAcademyofSciences，Shi

6、jiazhuang050081，China；4．CentralStationforPopularizationofAgriculturalTechnologyofHebeiProvince，Shijiazhuang050011，China)Abstract：Itwasestablishedinthisstudythatappliestothemissingtypescreeningandidentificationofthesoybeanlipoxygenasesforthebreedingofthenon—odorsoybean．Selectionthemethodwhic

7、hsuitablefornearisogeniclinesofsubtractiveimmunization，andusingJ12—2missingx2asthetoleragenandSoybeanLox(TypeI-B)containingLoxl，Lox2andLox3simultaneouslyasthe收稿日期：2014-O3antigen，andhybridomassecretingantibodies基金项目：国家“863”计划项目(2012AA101106)；国家现代农业against