[精品]高氏一号合成培养基的制备.doc

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1、实验五高氏一号合成培养基的制备、土壤中放线菌的分离实验目的：掌握配制合成培养基的一般方法。掌握稀释倒平板法从土壤屮分离放线菌的基本原理和基本操作技术。实验材料：药品：可溶性淀粉、KNO3>NaCl>K2HPO4-3H2O.MgSO4*7H2OxFeSO4-7H2O^琼脂。其他：高压蒸汽灭菌锅、扭力天平、药匙、烧杯、量筒、玻璃棒、三角瓶、试管、牛皮纸、硫酸纸、线绳、无菌培养1111、铁锹、小铲、酒精棉球、银子、玻璃铅笔。实验原理：高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。这种培养基是采用化学成分完全了解的

2、纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3、NaCl.K2HPO4-3H2O、MgSO47H2O作为无机盐，FeSO4-7H2O作为微生物的微量元素，提供铁离了等组成。放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤屮，其数量仅次于细菌，一般在屮性偏碱性、有机质丰富、通气性好的土壤屮含量较多。rti于土壤屮的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体屮分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。分离放线菌常用稀释倒平板法。根据放线菌的营养

3、、酸碱度等条件要求，常选用合成培养基或有机氮培养基。如果培养基成分改变，或十•壤预先处理（120°C热处理lh）,或加入某种抑制剂（如加数滴10%酚等）,都可以使细菌,霉菌出现的数量大大减少，从而淘汰了其它杂菌。再通过稀释法，使放线菌在固体培养基上形成单独菌落，并可得到纯菌株。实验内容：1•高氏一号合成培养基的制备先将可溶性淀粉称好，在小烧杯内用50〜100ml水调成糊状，再在另一容器内加入900〜950ml热水，将小烧杯内淀粉倒入混匀。再分别称取其它药品，并加热搅拌使Z溶解后,调pH至7.2〜7.4

4、,分装，0.1Mpa（151b/in2）15-30min高压蒸汽灭菌。2.土壤中放线菌的分离（1）取9套无菌平皿，在1111底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10H10'10'5）.组别、姓名、操作口期等。每个稀释度做三个培养血。然后在每皿屮倒入已溶化并冷至50°C左右的高氏一号培养基15〜20血左右，待冷凝成平板。（2）将土样放入用酒精擦拭过的乳钵屮，除去石块、草根、研磨压碎后，称取5g,放入盛有45ml无菌水的三角瓶中。振荡lOmin,即101的土壤悬液,静置30s。（3）另取装有9ml无菌水

5、的试管4支，编号10101010用无菌吸管无菌操作取101浓度的土壤悬液lml并加入编号102的无菌试管中，并吹吸吸管2〜3次，使与9ml水混匀，即为i（y2浓度的土壤稀释液。依此类推，肓到稀释至io,的试管屮（每个稀释度换1支无菌吸管）。（4）用无菌吸管从浓度最小稀释液开始，每次吸取0.5ml加到一纟R相应编号（10亠）的高氏一号平板上（每次吸取前，吸管要在液体内吹吸几次），再依次将10=10心的十•壤稀鄴液加到相应平板上。用无菌刮棒（从浓度小的稀释液开始）将加入平板培养基上的土壤稀释液在敕

6、个平板表面涂匀。（5）接种完毕，将平川1•放入2FC恒温箱培养7天，观察平川［上放线菌（主要是链霉菌）菌落。（6）挑4株菌划线接种在高氏一号合成培养基斜面上，28°C培养7天，作拮抗试验用。准备实验内容：【培养基/组:200ml（制备6个平皿（本次实验用，10支试管）】实验二十高氏1号培养基的制备一、目的要求通过对高氏1号培养基的制备，掌握配制合成培养基的一般方法。二、基本原理高氏1号培养基是分离和培养放线菌的合成培养基。这种培养基是由可溶性淀粉（作为碳源），KN03（作为氮源）,NaCKK2HPO4

7、・3110MgSOi•7H20（作为无机盐,为微生物提供钠、钾、磷、镁、硫等离了）和FeSO“・7IkO（作为微生物的微量元素，提供铁离了）等组成。由于磷酸盐和镁盐相混合时产生沉淀，因此，在混合培养基成分时，一般是按配方的顺序依次溶解各成分。对于彖FeSO,・7II.0这样的微最成分，则可预先配成高浓度的贮备液,在配制培养基时按需要加入一定的量。高氏1号培养基配方如下：可溶性淀粉20gNaCl0.5gKNO3lgK2HPO4・3H2O0.5gMgSOi・7H2O0.5gFeSOi・7H200.Olg琼

8、脂15—20g水1000mlpH7.4—7.6三、器材可溶性淀粉,KNO3,NaCl,K2HPO4・3H20,MgSOi・7H2O,FeS04・7H20,琼脂，lmol/LNaOH,lmol/LI1C1；试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸(pH5・5—9・0),棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。四、操作步骤1.称量和溶化按配方先称取可溶性淀粉，放入小烧杯屮，并用少量冷水将淀粉调成糊状，再加入少于所