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1、Rosco抗真菌药敏纸片扩散法临床应用分析【关键词】Rosco抗真菌山于广谱抗生素的大量应用及肿瘤的放疗、化疗和免疫抑制的使用，一方面使酵母样真菌的感染呈现上升趋势，另一方面使感染菌种也发生了迁移，有从白色念珠菌向其他酵母样真菌转移的趋势。同吋，真菌耐药现彖也逐渐增加。因此，体外真菌药敏试验，对于药物的选择及监测耐药株的出现均有重要意义。NCCLSM27酵母样真菌药敏试验方案加大了酵母菌药敏试验规范化进行，但其操作繁锁，日常工作中较难使用。从2003年5月开始我们应用了Rosco真菌药敏纸片扩散法，对临床菌株和标准菌株进行了药败
2、测定，该方法操作简便,结果淸晰易读取，在国外被用于临床实验室［1］。现将所作的156例真菌培养及体外药敏试验结果报告如下：1资料与方法1」标本來源来自2003年5月〜2004年5月临床分离的156株酵母样真菌。1.2材料标准菌株：白色念珠菌ATCC90028,克柔念珠菌ATCC6258,热带念珠菌ATCC75O。培养基：沙保氏培养基，法国科玛嘉显色培养基，改良SHADOMY琼脂，2%葡萄糖和0.5%μg/mL美兰MH琼脂，酵母真菌鉴定卡YBC。Rosco药敏纸片：酮康I些(KETO15μg),氟康I坐(FLZ15&m
3、u;g),益康卩坐(ECON10μg),两性霉素B(AMPHO10μg),制霧菌素(NYST50μg),5氟胞陀啖(5FC),购自广州乐通泰生物科技有限公司。25μg氟康I坐纸片由辉瑞公司提供。1.3菌种分离鉴定方法接种沙保氏培养基上，将分离到的酵母样真菌转种于科玛嘉显色培养基上，根据不同颜色判断菌种，不能用显色培养基鉴定的菌种，用VITEK32YBC卡进行鉴定。1.4药敏试验方法Rosco纸片扩散法：接种液浓度为5×105CFU/mL(先恥制0.5麦氏浓度，再用生理盐水1:1稀释)，用无菌棉
4、签蘸上接种液均匀涂布于SHADOMY琼脂平皿上，待平皿表面干后，贴上Rosco药敏纸片。对克柔念珠菌，先配制0.5麦氏浊度，再用生理盐水1:10稀释。NCCLS推荐的酵母菌纸片扩散法：接种液浓度为0.5麦氏浊度，用无菌棉签接种在葡萄糖美兰MH琼脂平皿上，5min〜10min贴上氟康H坐。35°C孵育18h〜24h后读取结果，若24h生长不足，延长至48h。2结果2.1156株酵母样真菌的菌种分布白色念珠菌96例，比例最髙为61.54%,热带23例(14.7%),光滑16例(10.3%),克柔9例(5.8%),近平滑4例(2.6%
5、),其他8例(3.8%)。2.2药敏结果Rosco纸片法检测的药敏结杲见表I°156株酵母样真菌的药敏结果：两性磚素B,5FC,制霧菌素的作用最强，益康II坐作用最差。氟康哇对克柔100%耐一药，对光滑50%耐药。NCCLS推荐的氟康II坐纸片法的药敏结果与Rosco纸片法的结果比较符合程度见农II。用两种方法対3株质控菌株进行测定，其抑菌环直径在规定范围。NCCLS法与Rosco法均敏感者有132株，占84.61%,全耐药者有17珠，占10.89%,全中介者有1株，占0.64%，总体符合程度为96.15%。表IRosco纸片法
6、检测酵母样真菌的耐药率表II两种方法氟康II坐的药敏结果比较符合程度3讨论抗真菌感染的有效治疗需要抗真菌药敏实验的支持。Ghamoum等［2］应用标准化“药敏”实验方法测定结果与临床应用的效果的一致率可达66.0%〜85.0%,可见，测定方法越标准化临床应用的结果越佳。金兰等［3］报道，Rosco纸片法与NCCLS肉汤稀释法的符合率在90%左右。本实验采用NCCLS推荐的纸片法与Rosco対比英符合程度在96.15%,血口没有出现NCCLS法S或R而Rosco法R或S的错误记录。我们应用Rosco纸片扩散法24h和48h的读収结
7、果，其抑菌环直径没有差异，与NCCLS大量肉汤稀释法相比最大的优点是操作方便，结果清晰易读収，且与NCCLS标准有良好的符合率，我们认为Rosco抗真菌药敏纸片可以用于常规的酵母样真菌药敏实验。本实验对6种抗真菌药物体外抑菌试验结果表明：两性霉素B、5FC、制霉菌素対念珠菌活性垠强，但两性霉素B毒副作用大，临床应用量少。氟康II坐山于副作用小，能广泛渗透体液纽织器官，对酵母样真菌的感染治疗效果好，在临床广泛应用于真菌感染的治疗和预防真菌感染的预防性治疗，使氟康卩坐的敏感率降低[4]。真菌的耐药在临床上虽不是一个非曲严重的问题，但
8、在临床治疗上很赚于•，因为真菌感染帘发生在严重疾病的基础上，病死率很高，而且抗真菌药物有限，选择范围不大，若不进行休外实验，单靠经验用药，有可能遇上耐药菌株，影响患者的治疗。因此建立常规的真菌药敏试验，指导临床合理选择真菌药物非常重要。【参考文献】[1]Vand
